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公开(公告)号：CN106995487B
公开(公告)日：2019-12-03
申请号：CN201710248386.1
申请日：2017-04-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/01
Abstract: 本发明涉及一种源于鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)VP1‑aa 23‑43多肽作为高效细胞穿膜肽的应用。所述VP1‑aa 23‑43多肽序列如SEQ ID NO.2所示。该多肽可以携带FITC在30min内进入293T细胞、HCT‑116细胞、3T3细胞、MDCK细胞、MSB1细胞，而且穿膜效率与穿膜肽浓度呈正相关性，关键特点其可高效进入悬浮培养细胞。结合激光共聚焦显微镜和流式细胞术结果显示，鸡传染性贫血病毒VP1‑aa 23‑43多肽在10μM时具有比TAT短肽的穿膜效率高2倍多。
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公开(公告)号：CN106565829A
公开(公告)日：2017-04-19
申请号：CN201610937115.2
申请日：2016-11-01
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C07K14/005 , C12N15/70 , C12N2750/10022 , C12N2800/101
Abstract: 本发明还提供了一种GyV9环形病毒VP3蛋白制备方法，该方法基于重组酶ExnaseTM II将线性化的pGEX‑6p‑1载体与GyV9病毒VP3基因片段PCR产物不经酶切连接反应，直接重组克隆技术；并转化到大肠杆菌，实现VP3蛋白表达；其中，PCR扩增所述的GyV9病毒VP3基因片段时所用引物的核苷酸序列如下：上游引物1：5’‑GTTCCAGGGGCCCATGGATGCGACGGGCAC‑3’；下游引物1：5’‑GTTTTCACCGTCATTACAATCTTGCGCCTT‑3’。该方法简化克隆过程，可快速构建GyV9病毒VP3基因的原核表达载体，实现VP3基因快速克隆表达。本发明获得的GyV9病毒VP3表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3蛋白作为GyV9诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展GyV9流行病学调查提供有效诊断试剂；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN105037503B
公开(公告)日：2016-12-21
申请号：CN201510357985.8
申请日：2015-06-25
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种AGV2型环形病毒VP3可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX-6p-1线性化载体以及AGV2病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP3可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP3功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN115925827B
公开(公告)日：2023-11-21
申请号：CN202211515199.2
申请日：2022-11-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/19
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公开(公告)号：CN109970851A
公开(公告)日：2019-07-05
申请号：CN201910257290.0
申请日：2019-04-01
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/52
Abstract: 本发明涉及一种CCV病毒M蛋白的单抗及其制备方法、免疫胶体金试纸条的制备方法，具体涉及CCV病毒M蛋白的单抗，包括CCV M蛋白特异单克隆抗体2H11、2G3。其制备方法；以分离纯化的CCV灭活病毒为免疫抗原，用单克隆抗体技术制备出CCV单抗；经western‑blot试验鉴定单抗针对M蛋白，再用重组酶ExnaseTM II技术对CCV病毒M蛋白的基因克隆进线性化的pCDNA3.1载体，转染293T细胞进行M蛋白表达，IFA试验验证，获得2株CCV病毒M蛋白特异单抗2H11、2G3。本发明还公开了犬冠状病毒胶体金检测试纸条的制备方法。本发明特异性强、敏感性高、操作简单、成本低，适用于临床及田间检测，用于CCV病原学诊断、流行病学调查和动物医院快速诊断。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108414750A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810063994.X
申请日：2018-01-23
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/531 , G01N33/543
Abstract: 本发明提供了一种血清4型禽腺病毒双单抗夹心ELISA抗原检测试剂盒，其中包括：包被抗FAdV-4纤突蛋白蛋白单克隆抗体（捕获抗原的抗体）的酶标板、酶标记抗FAdV-4纤突蛋白单克隆抗体（检测抗体）。捕获抗体和检测抗体分别针对FAdV-4纤突蛋白2种不同的抗原决定簇：包被在酶标板的抗FAdV-4纤突蛋白单克隆抗体和酶标记抗FAdV-4纤突蛋白单克隆抗体。本发明试剂盒操作简便、快速，能特异性检测出4型禽腺病毒，而与流感病毒（AIV）、马立克病毒（MDV）、血清8型禽腺病毒（FAdV-8）、禽网状内皮组织增生症病毒（REV）、禽白血病病毒（ALV）、传染性法氏囊病毒（IBDV）以及SPF鸡肝组织研磨液等均不反应。该方法所需成本低廉，经济效益显著、应用前景广泛。
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公开(公告)号：CN105037504B
公开(公告)日：2016-11-30
申请号：CN201510359309.4
申请日：2015-06-25
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种AGV2型环形病毒VP2可溶性蛋白及其制备方法。是利用pGEX‑6p‑1线性化载体以及AGV2病毒VP2基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP2，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现AGV2的VP2蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP2可溶性蛋白。本发明获得的AGV2病毒VP2可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供VP2可容性蛋白作为AGV2诊断抗原；作为免疫原获得抗VP2多克隆抗体；为开展AGV2血清学流行病学调查及VP2功能研究提供有效免疫学试剂，填补国内外空白；并为进一步探究VP2生物学功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN104726498A
公开(公告)日：2015-06-24
申请号：CN201510153415.7
申请日：2015-04-02
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/867
Abstract: 本发明涉及一种基于J亚群禽白血病病毒LTR的线性化真核表达载体的构建及应用。本发明是SEQ ID NO.1和2的序列为引物，以JSNT毒株为模板，进行PCR扩增得ALV-J病毒LTR线性化载体；本发明不仅可用于研究ALV-J或其它反转录病毒的复制、转译、致病等机制；而且能实现对外源基因的快速克隆、高效表达。
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公开(公告)号：CN104450695A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410704520.0
申请日：2014-11-26
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种流感病毒基因克隆方法，具体涉及A型流感病毒基因PCR扩增引物及A型流感病毒基因快速克隆方法。本发明提供了A型流感病毒8个基因片段的PCR扩增引物和流感病毒反向遗传线性化载体的引物。本发明还提供了A型流感病毒基因快速克隆方法，用上述引物通过PCR反应即聚合酶链式反应扩增出流感病毒基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体，然后利用重组酶将上述线流感病毒各基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体在体外重组克隆，并转化到大肠杆菌进行克隆。本发明的大大简化了传统的流感病毒反向遗传技术中的基因克隆过程，解决传统的流感病毒反向遗传技术中流感病毒基因的克隆过程复杂、效率不高的问题。
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公开(公告)号：CN116555198A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310557052.8
申请日：2023-05-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/08 , C12N15/50 , A61K39/215 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一株犬冠状病毒细胞传代减毒毒株CCoV JS1706/Pr110及其应用，其微生物保藏编号为CGMCC NO：45422。该减毒毒株是通过A‑72细胞和CrFK细胞交叉传代110代获得。基因序列分析表明，该毒株与亲本毒株CCoV JS1706/P6相比，其结构蛋白S、E和M的氨基酸有突变，ORF7b基因发生大片段缺失。该减毒株病毒产量高，滴度大于107TCID50/mL，对健康犬无致病性。应用该毒株制备的活病毒疫苗和灭活疫苗免疫犬产生良好中和抗体应答，具有良好的免疫原性。将该毒株开发成为疫苗可用于防控犬冠状病毒病。
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