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公开(公告)号：CN106442523A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610597505.X
申请日：2016-07-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/84
Abstract: 本发明公开了一种精确测定切花菊花药开裂程度的方法及其应用，属于菊花遗传育种及生殖生物学领域。该方法包括：(1)获取待测样品的管状花，并对管状花进行解剖，获得花药鲜样，置于玻璃载玻片上；(2)将步骤(1)中的载玻片迅速置于显微镜下开始拍照和录像，然后滴加渗透液至花药鲜样上；(3)对步骤2)中花粉粒从开裂的花药中散出过程进行全程显微录像；(4)根据录像及照片，统计达到稳态后花药外花粉粒数，然后通过公式计算出花药开裂程度。本发明针对品种间散粉量、散粉速度差异极大的切花菊，提供了一种精确测定菊花花药开裂程度的方法，为研究菊花花药开裂程度遗传规律、发掘控制花药开裂程度的有关基因奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104673938A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510100532.7
申请日：2015-03-06
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2549/119
Abstract: 本发明属于分子生物学病毒检测领域，提供一种高灵敏度检测菊花B病毒的引物、利用该特异引物检测菊花B病毒的方法及引物的应用。其中，本方法步骤如下：1)设计针对菊花B病毒的两轮特异性引物；2)以CVB1-R为引物，对待检测菊花DNA进行反转录得到cDNA，并以步骤1)所述两轮特异性引物进行巢式PCR扩增；3)将步骤2)进行的第二轮PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，当获得381bp特异性片段时，表示待检测菊花感染菊花B病毒。本发明由于加入了特异的反转录引物进行巢式PCR，极大地提高了菊花B病毒检测灵敏度，经过验证灵敏度达到10-9ug/ul。本发明提供的方法，菊花CVB检测特异性强，工序简单，成本低廉。
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公开(公告)号：CN103232996B
公开(公告)日：2014-11-12
申请号：CN201310121313.8
申请日：2013-04-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、试验材料及其表型数据的获得；b、菊花连锁图谱构建；c、结合表型数据和分子遗传图谱，进行菊花分枝性状的QTL分析；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定。本发明以‘QX‐145’（P1）为母本、‘南农银山’为父本（P2）杂交获得的92株F1分离群体为试材，获得了多个与菊花分枝性状显著关联的分子标记。菊花分枝性状关联分子标记的获得，可用于菊花分枝性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快育种进程。
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公开(公告)号：CN103232996A
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201310121313.8
申请日：2013-04-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种菊花分枝性状关联分子标记的获得方法，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、试验材料及其表型数据的获得；b、菊花连锁图谱构建；c、结合表型数据和分子遗传图谱，进行菊花分枝性状的QTL分析；d、菊花分枝性状关联分子标记的确定。本发明以‘QX‐145’（P1）为母本、‘南农银山’为父本（P2）杂交获得的92株F1分离群体为试材，获得了多个与菊花分枝性状显著关联的分子标记。菊花分枝性状关联分子标记的获得，可用于菊花分枝性状的优良基因的精细定位和克隆，大大提高选择效率，从而加快育种进程。
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公开(公告)号：CN102676545B
公开(公告)日：2013-05-29
申请号：CN201210172706.7
申请日：2012-05-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及菊花‘钟山紫桂’生长素响应蛋白Aux/IAA编码基因CmIAA1表达载体构建。本发明所构建的表达载体pCAMBIA 1301-CmIAA1是由CmIAA1基因插入到克隆载体pMD19-T simple vector，经BamH I和Xba I双酶切后连接到载体pCAMBIA 1301的BamH I和Xba I位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，CmIAA1基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成Aux/IAA蛋白，影响生长素信号途径，对植物生长发育产生负调控作用，抑制植物主根伸长，促使侧根增多，并抑制植物整体生长进度。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103004585A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210534830.3
申请日：2012-12-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用卡那霉素快速筛选菊花转基因植株的方法，包括以下几个步骤：（1）确定菊花叶盘不定芽分化Kan筛选浓度、菊花茎段生根Kan筛选浓度以及Kan溶液浸泡筛选浓度和观察时间；（2）对菊花转化植株进行分化再生阶段和生根阶段的筛选得到生根株系；再将生根株系经Kan溶液浸泡筛选后得到转基因菊花Kan抗性株系；（3）转基因菊花的PCR验证：根据转基因载体中的35S启动子序列设计引物对筛选的转基因菊花Kan抗性株系进行PCR 扩增，验证载体片段是否插入菊花基因组。该方法简单准确，能有效地剔除大量假阳性植株，对于实现菊花转基因植株的规模化快速筛选、加快育种进程具有重要意义。
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公开(公告)号：CN102175554A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201110007021.2
申请日：2011-01-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物栽培与育种技术领域，公开了从多个切花菊品种中筛选氮利用效率相对最高的品种的方法，该方法包括以下几个步骤：a、获取水培苗；b、砂培初筛：将水培苗分为两组，一组进行低氮处理，另一组进行正常氮处理；分别测定每个品种的筛选指标：相对干物质重、相对含氮量、相对叶绿素含量，筛选出2～6个氮利用效率较高的品种和2～6个氮利用效率较低的品种作为对照；c、营养液培养复筛：将步骤b中筛选出的品种进行营养液培养，重复筛选出1个氮利用效率相对最高品种和1个氮利用效率相对最低的品种。本方法最终筛选出的切花菊品种，为进一步对现有切花菊品种进行了改良，研究其生物学特性和生理生化机制提供材料。
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公开(公告)号：CN101513167B
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN200910029625.X
申请日：2009-04-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明获得菊属与近缘属属间远缘杂种的方法，属于生物技术育种领域。选择栽培菊花品种为母本，以野生的抗病虫能力强或具特异观赏价值的近缘属物种为父本，采用组织培养手段进行杂种胚的离体培养，以克服菊属与近缘属远缘杂交后合子胚败育的障碍。对获得的后代材料进行杂种形态学鉴定和原位杂交鉴定，选择茎、叶、花序、表皮毛等形态学特征介于双亲之间、与母本不同、出现父本特异性状或双亲不具有的新性状的后代材料，进行原位杂交，若染色体组成为分别来源于双亲，即为获得的属间远缘杂交种。应用本方法成功地实现了菊属与多个近缘属的属间远缘杂交种，对现有栽培菊花品种进行了改良，并创造了一批有应用价值的新种质。
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公开(公告)号：CN101451140B
公开(公告)日：2010-09-15
申请号：CN200910028638.5
申请日：2009-01-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种匍匐型地被菊遗传转化的方法，属于菊花分子育种领域。以菊花品种‘钟山红枫’RNA为模板扩增合成DREBa基因，克隆到T-载体，双酶切获取的DREBa基因目的片段与pCAMBIA 1301连接，而后转化农杆菌，获得含有重组质粒pCAMBIA1301-DREBa的农杆菌菌液；无菌苗叶圆片用农杆菌液侵染10min，共培养3d、脱菌培养3d、筛选培养获得具潮霉素抗性的生根苗。经PCR检测证实外源基因已转入地被菊基因组DNA中。本发明首次针对匍匐型地被菊建立了其遗传转化体系，为地被菊分子育种工作提供了理论基础和实验依据，将有效推动其分子育种进程。
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公开(公告)号：CN100574612C
公开(公告)日：2009-12-30
申请号：CN200710019345.1
申请日：2007-01-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种菊花种质资源离体保存的方法，专用于菊花种质资源离体保存。取菊花脚芽为外植体，以腋芽进行继代增殖。在分别附加了20～40mg.L-1脱落酸(ABA)的MS+0.3mg.L-16-BA+0.1mg.L-1NAA培养基中进行保存，10个月后存活率均为100%，比正常培养基上生长的试管苗延长存活6个月。保存材料恢复生长正常，其后代经过氧化物酶(POD)及酯酶(EST)同工酶、ISSR分子标记检测未发生遗传变异。本发明首次利用在培养基中添加脱落酸保存菊花试管苗并对其后代进行遗传稳定性鉴定，不但保存10个月后植株生长正常，而且保存材料的后代未发生遗传性变异。
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