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公开(公告)号：CN112972673B
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202110142607.3
申请日：2021-02-02
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒的制备方法，先用化学合成的方法使PLGA和NH2‑PEG形成PLGA‑PEG共聚物，然后用复乳溶剂挥发法(W/O/W)将本实验构建的两个结核分枝杆菌融合蛋白ESAT6‑Rv2626c和Mtb10.4‑HspX(简称为M4)包裹在纳米颗粒中，进而应用聚多巴胺和PolyI:C进行修饰，形成包裹结核分枝杆菌融合蛋白M4的PLGA‑PEG‑PolyI：C(简称为NP)纳米颗粒结核亚单位疫苗NP/M4。采用本发明所提供的纳米颗粒结核亚单位疫苗免疫小鼠后，NP/M4组在HspX蛋白、Rv2626c蛋白刺激后，脾脏淋巴细胞分泌IFN‑γ和IL‑2的水平明显高于PBS组和BCG组，表明NP/M4组可产生较高水平的IFN‑γ和IL‑2；此外，NP/M4组HpsX和Rv2626c特异性IgG和sIgA抗体水平明显高于PBS、BCG和融合蛋白M4组。PLGA‑PEG‑PolyI：C纳米颗粒可辅助抗原诱导细胞免疫和体液免疫，是结核亚单位疫苗理想的佐剂。
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公开(公告)号：CN112111462A
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN202010963441.7
申请日：2020-09-14
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明提供两株分泌烯醇化酶ENO1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号分别为：CCTCCNO:C2020150和CCTCCNO:C2020151，保藏日期为：2020年9月6日。本发明还提供由上述的杂交瘤细胞株产生的烯醇化酶ENO1单克隆抗体，在制备抑制宫颈癌迁移或宫颈癌细胞增殖的药物中的应用。本发明首次将ENO1基因克隆入真核表达载体，表达和纯化出ENO1蛋白。应用ENO1蛋白免疫小鼠，通过杂交瘤技术成功制备并筛选出高效价ENO1mAb，并测序获得其可变区基因序列。本发明的ENO1mAb具有较好的安全性和抗宫颈癌效果，有望应用于临床肿瘤治疗。
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公开(公告)号：CN104098700A
公开(公告)日：2014-10-15
申请号：CN201410187154.6
申请日：2014-05-05
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K19/00 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/20 , C07K1/18 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/04 , A61P31/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白EAMMH，同时还提供了其构建、表达和纯化方法及其应用。该融合蛋白以可溶形式表达，明显改善了EAMM以包涵体进行表达的缺点。该融合蛋白与佐剂联合构建的结核亚单位疫苗（LT69）具有较强的免疫保护力，优于传统的BCG疫苗及EAMM＋MH联合疫苗；该疫苗作为加强型疫苗可以明显增强BCG初始免疫的免疫力及抗结核的保护效果，并且一定程度上减轻肺脏的病理损伤；此外，该亚单位疫苗包含了结核分枝杆菌生长期和潜伏期的多种抗原，可诱导较强的针对各期结核菌抗原的特异性细胞免疫和体液免疫应答，对不同代谢状态的结核菌均据有防护作用，且保护时间长，有望成为临床结核病预防的有效疫苗。
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公开(公告)号：CN102154324A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201010613320.6
申请日：2010-12-29
Applicant: 兰州大学
CPC classification number: C07K14/34 , A61K39/04 , C07K2319/00 , C07K2319/40 , Y02A50/478
Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3的构建、表达和纯化方法及其应用，将Mtb10.4和Hsp16.3基因进行PCR扩增并依次插入到克隆载体的多克隆位点中,构建重组载体；然后在大肠杆菌中表达；最后进行纯化得到融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3，该融合蛋白可在结核亚单位疫苗中应用。本发明的优点在于：该融合蛋白疫苗可诱导动物较强的细胞和体液免疫反应；通过动物攻毒实验表明，该疫苗在BCG免疫基础上，具有加强免疫作用，可提高和延长BCG的保护效果；且该疫苗无明显毒副作用。
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公开(公告)号：CN104098700B
公开(公告)日：2017-06-16
申请号：CN201410187154.6
申请日：2014-05-05
Applicant: 兰州大学
IPC: C07K19/00 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/20 , C07K1/18 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/04 , A61P31/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白EAMMH，同时还提供了其构建、表达和纯化方法及其应用。该融合蛋白以可溶形式表达，明显改善了EAMM以包涵体进行表达的缺点。该融合蛋白与佐剂联合构建的结核亚单位疫苗（LT69）具有较强的免疫保护力，优于传统的BCG疫苗及EAMM＋MH联合疫苗；该疫苗作为加强型疫苗可以明显增强BCG初始免疫的免疫力及抗结核的保护效果，并且一定程度上减轻肺脏的病理损伤；此外，该亚单位疫苗包含了结核分枝杆菌生长期和潜伏期的多种抗原，可诱导较强的针对各期结核菌抗原的特异性细胞免疫和体液免疫应答，对不同代谢状态的结核菌均据有防护作用，且保护时间长，有望成为临床结核病预防的有效疫苗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104225591A
公开(公告)日：2014-12-24
申请号：CN201410470358.0
申请日：2014-09-15
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明提供一种免疫佐剂，所述免疫佐剂由阳离子脂质体二甲基三十六烷基铵（DDA）、聚肌胞（PolyI：C）和胆固醇组成。本发明通过筛选可增强佐剂稳定性的试剂，并兼顾疫苗免疫活性及临床应用，发现胆固醇联合DDA、PolyI：C构建新型疫苗佐剂DDA+PolyI：C+胆固醇（简称DPC），增加了佐剂DDA和PolyI:C的稳定性，且粒径小于DDA+PolyI：C（简称DP），易于后期研发和生产的进行；将其与融合蛋白LT70进行联合构建结核亚单位疫苗LT70-DPC，发现整体保护效果强于BCG和LT70-DP。
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公开(公告)号：CN102154324B
公开(公告)日：2012-11-28
申请号：CN201010613320.6
申请日：2010-12-29
Applicant: 兰州大学
CPC classification number: C07K14/34 , A61K39/04 , C07K2319/00 , C07K2319/40 , Y02A50/478
Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3的构建、表达和纯化方法及其应用，将Mtb10.4和Hsp16.3基因进行PCR扩增并依次插入到克隆载体的多克隆位点中,构建重组载体；然后在大肠杆菌中表达；最后进行纯化得到融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3，该融合蛋白可在结核亚单位疫苗中应用。本发明的优点在于：该融合蛋白疫苗可诱导动物较强的细胞和体液免疫反应；通过动物攻毒实验表明，该疫苗在BCG免疫基础上，具有加强免疫作用，可提高和延长BCG的保护效果；且该疫苗无明显毒副作用。
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公开(公告)号：CN102180974B
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201110068820.0
申请日：2011-03-22
Applicant: 兰州大学
CPC classification number: A61K39/04 , C07K14/35 , C07K2319/00
Abstract: 本发明公开了一种结核杆菌融合蛋白，是序列表中序列2的蛋白质，并提供了其制备方法和制备疫苗的应用。本发明所提供的构建并表达纯化去标签融合蛋白ESAT6-Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(EAMM)，目的是建立针对结核杆菌的免疫应答，以提高疫苗保护效果。本发明所构造的融合蛋白EAMM和佐剂混合作为结核亚单位疫苗，诱导Th1型细胞免疫为主的免疫反应和体液免疫反应，具有较强的免疫原性并且有很好的抗结核保护效果。
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公开(公告)号：CN103203018A
公开(公告)日：2013-07-17
申请号：CN201310101948.1
申请日：2013-03-27
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了一种结核亚单位疫苗复合佐剂，所述复合佐剂包含有阳离子脂质体二甲基三十六烷基铵DDA、TLR9配体CpG寡脱氧核苷酸2395和TLR3配体PolyICLC，并提供了以其制备的结核亚单位疫苗及制备方法和应用。本发明的有益效果为：本发明提供的结核亚单位疫苗复合佐剂，增强了结核分枝杆菌融合蛋白的免疫原性，有助于结核融合蛋白诱导Th1型抗结核免疫应答。
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公开(公告)号：CN102247595A
公开(公告)日：2011-11-23
申请号：CN201110199072.X
申请日：2011-07-15
Applicant: 兰州大学
Abstract: 本发明公开了一种聚肌胞联合二甲基三十六烷基铵混合佐剂在制备结核亚单位疫苗中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的混合佐剂DDA/PolyI:C，能够有效增强融合蛋白AMM的抗原特异性IFN-γ的分泌水平，减轻H37Rv感染造成的病理损伤，是预防肺结核疫苗的有效佐剂。
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