一种转座载体及其构建方法

    公开(公告)号:CN102286514A

    公开(公告)日:2011-12-21

    申请号:CN201110203354.2

    申请日:2011-07-20

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,公开了一种转座载体及其制备方法。本发明所述转座载体融合了PB和SB两种DNA转座子的特性,能够在PB转座酶和SB转座酶条件下转座,同时整合了包括剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因和SV40的多聚腺苷酸加尾序列的基因捕获阅读框,用以在转座过程中实现基因的插入突变,可广泛应用于小鼠、大鼠、猪等哺乳动物的基因突变模型的建立及基因组内大规模基因功能筛选。本发明所述转座载体还包括loxp位点和Frt位点序列,可以实现转座后近距离DNA片段的条件性敲除,应用于小鼠、大鼠、猪等哺乳动物的大片段DNA序列的条件性缺失模型建立。

    人源细胞的人线粒体DNA特异片段扩增检测法

    公开(公告)号:CN101988123A

    公开(公告)日:2011-03-23

    申请号:CN201010261205.7

    申请日:2010-08-24

    Abstract: 本发明属于生物工程领域,特别是涉及人类线粒体DNA特异性片段扩增技术在人源细胞检测中的应用。所述人类线粒体DNA特异片段PCR扩增技术在人源细胞DNA检测中具有良好的特异性,该方法的灵敏度比常用人类基因组Alu基因序列特异性引物PCR扩增的灵敏度要高,且操作简便、节约时间、费用低廉,能够满足常规嵌合体基因型检测的需要,因此,人mtDNA特异性保守序列PCR扩增是一种理想的人源细胞检测方法。

    大鼠精子玻璃化冷冻的一种新型冷冻保护剂

    公开(公告)号:CN106135194A

    公开(公告)日:2016-11-23

    申请号:CN201510161135.0

    申请日:2015-04-08

    Inventor: 张连峰 刘牧

    Abstract: 本发明公开了一种用于SD大鼠以及以SD大鼠为遗传背景的基因工程大鼠的精子冷冻保护剂,所述的大鼠精子冷冻保护剂利用豆浆(bean milk)提取液作为大鼠精子冷冻保护剂(rat sperm cryopreservation agent;RS-CPA)的一个主要添加成分,所占比例为5%,另外该冷冻保护剂中还包括棉籽糖。本发明的大鼠冷冻保护剂,通过添加了豆浆提取液,大大提高了复苏后精子的活力和受精率,冷冻复苏率在10%以上。

    一种人源化大鼠药物评价动物模型建立的方法

    公开(公告)号:CN104593418A

    公开(公告)日:2015-05-06

    申请号:CN201510061140.4

    申请日:2015-02-06

    Inventor: 张连峰 马婧

    Abstract: 本发明提供了用于一种产生人源化大鼠药物评价动物模型的建立方法,本发明利用CRISPR/Cas9基因敲除技术通过显微注射的方法获得敲除多药耐药基因1(Abcb1)的基因工程大鼠,同时利用大片段转基因技术将包含人源Abcb1启动子和cDNA的153kb细菌人工染色体(BAC)片断通过显微注射的方法转入到大鼠基因组,得到稳定表达人Abcb1的转基因大鼠,将这两种大鼠杂交建立了人源化Abcb1大鼠药物评价动物模型。经过RT-PCR分析发现人源化Abcb1大鼠的Abcb1表达谱与大鼠内源Abcb1有明显的区别。本发明的有益效果在于获得一种可以表达人源Abcb1的人源化大鼠,这种大鼠不仅表达人源Abcb1基因,在表达谱方面也与人类更接近,该模型能很好地用于新开发药物的药效评价。

    大鼠线粒体基因G14098A的突变方法及其应用

    公开(公告)号:CN113699160B

    公开(公告)日:2023-03-31

    申请号:CN202110937125.7

    申请日:2021-08-16

    Abstract: 大鼠线粒体基因G14098A的突变方法及其应用。本发明利用DdCBE碱基编辑技术,依据目标突变位点,设计两条包含突变位点的TALE靶点识别序列,通过筛选DdCBE组合,将DdCBE定位到相应的目标序列以使目标碱基由G突变为A。本发明的突变方法具有高精确性和低脱靶效应。本发明通过大鼠受精卵显微注射,能够实现大鼠的线粒体基因第14098位的G突变为A。雌性突变大鼠与野生型大鼠杂交进行突变传代分析,表明突变能够稳定传代;行为学和心脏功能评价证实该大鼠模型具有人类线粒体突变疾病表型。

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