用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法

    公开(公告)号:CN116042634A

    公开(公告)日:2023-05-02

    申请号:CN202211313920.X

    申请日:2022-10-25

    Abstract: 本发明提供一种用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法。利用DdCBE碱基编辑工具,使大鼠mtDNA编码基因密码子TGA(编码氨基酸W)或CAA(编码氨基酸Q)转变为终止密码子TAA,导致翻译提前终止。通过CRISPR/Cas9技术将Cre依赖性表达的LSL‑DdCBE元件敲入大鼠Rosa26位点,建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠。通过与Cre工具大鼠杂交,激活DdCBE的表达和编辑,从而实现组织或细胞特异性mtDNA编码基因的敲除。本发明针对mtDNA编码基因敲除的技术限制,通过DdCBE工具和Cre‑loxP系统的联合应用,开发一种能够在大鼠中实现条件性敲除mtDNA编码基因的方法。

    大鼠线粒体基因G14098A的突变方法及其应用

    公开(公告)号:CN113699160A

    公开(公告)日:2021-11-26

    申请号:CN202110937125.7

    申请日:2021-08-16

    Abstract: 大鼠线粒体基因G14098A的突变方法及其应用。本发明利用DdCBE碱基编辑技术,依据目标突变位点,设计两条包含突变位点的TALE靶点识别序列,通过筛选DdCBE组合,将DdCBE定位到相应的目标序列以使目标碱基由G突变为A。本发明的突变方法具有高精确性和低脱靶效应。本发明通过大鼠受精卵显微注射,能够实现大鼠的线粒体基因第14098位的G突变为A。雌性突变大鼠与野生型大鼠杂交进行突变传代分析,表明突变能够稳定传代;行为学和心脏功能评价证实该大鼠模型具有人类线粒体突变疾病表型。

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