公开(公告)号：CN118360331A

公开(公告)日：2024-07-19

申请号：CN202410079320.4

申请日：2024-01-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 宋军 ,  赵祥杰 ,  陶源 ,  尹智 ,  刘忠华

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/0276 ,  C12N15/89 ,  C12N15/113 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55

Abstract: 本发明属于动物模型构建领域，具体涉及PRKDC基因敲除的动物模型的构建方法和应用，在本课题之前的研究中发现采用传统的靶向第一、二等靠前的外显子虽然可以获得PRKDC基因敲除动物，但是无法获得免疫缺陷表型。本发明针对PRKDC基因激酶功能区第#78和#80三个外显子设计两条sgRNAs，大片段的敲除来获得具有免疫缺陷表型的PRKDC基因敲除兔。将sgRNA序列与U6启动子相连，经体外转录等步骤制备显微注射使用的Cas9mRNA和gRNA，将两张RNA混和后，注射到原核期兔受精卵经胚胎移植获得仔兔，通过PCR扩增及Sanger测序鉴定PRKDC基因敲除的家兔模型，本发明构建PRKDC基因敲除的动物模型具有免疫缺陷表型，在模拟人类免疫缺陷疾病以及在肿瘤、人源化研究上具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN114081953A

公开(公告)日：2022-02-25

申请号：CN202111217352.9

申请日：2021-10-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 颜廷胜 ,  刘忠华 ,  许淼 ,  胡岚馨

IPC: A61K45/06 ,  A61K47/60 ,  A61K47/69 ,  A61K49/00 ,  A61K31/69 ,  A61K31/704 ,  A61K38/05 ,  A61P35/00 ,  C08G81/00

Abstract: 一种前药树状聚合物纳米载体及其制备方法与应用，属于纳米药物载体材料领域，所述纳米载体由逐级缩氨酸法、疏水自组装和交联化反应制备。该系统具有多功能化的靶向分子配体，这些靶向配体既可以作为靶向元件，提高载体的主动靶向能力，又可作为尺寸转换元件，提高药物肿瘤的渗透能力。该药物传递系统可通过初级药物释放，改变肿瘤局部微环境，从而引发次级药物释放，实现肿瘤的级联治疗。本发明针对药物传递过程中面临的多重生物屏障和复杂动态微环境，采用多重靶向、尺寸转换和药物分级释放的方法，有望实现图像引导的精准、高效的肿瘤级联放大治疗。

公开(公告)号：CN108244095B

公开(公告)日：2018-11-02

申请号：CN201710802837.1

申请日：2017-09-08

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 翁晓刚 ,  牟彦双 ,  张宇霆 ,  蔡铭铭 ,  宋健 ,  刘忠华

IPC: A01N1/02 ,  A61D19/02

Abstract: 一种猪冻精解冻稀释液及其配制方法，本发明属于猪冻精解冻技术领域。本发明要解决的技术问题是猪冷冻精液在解冻稀释过程中极易发生精子的氧化损伤。本发明的组分：D‑葡萄糖、果糖、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、碳酸氢钠，柠檬酸三钠、聚乙烯醇、庆大霉素、黄芪多糖和白藜芦醇。方法：一、将D‑葡萄糖、果糖、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、碳酸氢钠，柠檬酸三钠、聚乙烯醇，用双蒸水配制成水溶液；二、置于26℃水浴锅中平衡至充分溶解并且pH值稳定；三、除菌滤器过滤；四、使用前30分钟加入庆大霉素、黄芪多糖和白藜芦醇。本发明有效地产生抗氧化作用，降低了冻精解冻稀释过程剧烈稳定变化对精子的氧化损伤。

公开(公告)号：CN108707600A

公开(公告)日：2018-10-26

申请号：CN201810553064.2

申请日：2018-05-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 刘忠华 ,  牟彦双 ,  郭佳 ,  方园 ,  厉雪纯

IPC: C12N15/08

CPC classification number: C12N15/02

Abstract: 一种猪鼠细胞单细胞融合方法，属于细胞工程技术领域。本发明针对目前异种细胞融合效率低的问题，提供了一种单细胞融合方法,以小鼠胚胎干细胞与猪多能性干细胞或猪成纤维细胞作为细胞融合对象，用含质量分数为0.25％的胰酶的消化液将猪、鼠细胞消化成单细胞，经培养后，利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对，在含有质量分数为50％的聚乙二醇中培养1min，随后将细胞继续培养7天，获得猪鼠单细胞的融合细胞。本发明适用于动物育种研究或单克隆抗体的生产。

公开(公告)号：CN108245277A

公开(公告)日：2018-07-06

申请号：CN201810054633.9

申请日：2018-01-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 翁晓刚 ,  刘龑 ,  张宇霆 ,  尹智 ,  刘忠华

IPC: A61D7/04

CPC classification number: A61D7/04

Abstract: 一种大体型猪用气管插管，涉及一种气管插管，属于兽类医疗器械领域。解决了一直使用人用气管插管代替猪用气管插管，没有用于大型猪用气管插管的现状，研发出一种专门用于大型猪的气管插管。该插管包括释药环、气囊、注药细软管、充气细软管、插管管身和插管尾部管头，插管头部的内部固定有释药环，插管头部的外壁套有气囊，插管管身的末端与插管尾部管头固定连接，充气细软管在插管管身的内部一端穿出管壁与气囊相连通，另一端从插管管身的尾端管壁穿出，注药细软管一端与释药环相连通，另一端从插管管身的尾端管壁穿出。本发明适用于手术过程中插入猪气管对猪进行麻醉。本发明具有结构简单、操作方便，成本低，便于规模化生产与市场推广的优点。

公开(公告)号：CN107099850B

公开(公告)日：2018-05-04

申请号：CN201710463397.1

申请日：2017-06-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 吕嘉伟 ,  赵艳华 ,  刘忠华

IPC: C40B50/06 ,  C12N15/113

Abstract: 一种通过酶切基因组构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库的方法，涉及一种基因组敲除文库的构建方法。是要解决现有敲除文库构建方法存在物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力的问题。方法：一、构建Mspl.f‑library文库；二、获得20bp gRNA靶序列片段；三、构建PAM‑f.library文库；四、Lenti‑gRNA‑library文库构建。本发明获得gRNA文库的方法不依赖于已知物种基因组序列信息，避免了物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力等缺点，大大提高敲除文库的覆盖率。本发明用于构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库。

公开(公告)号：CN104152406B

公开(公告)日：2017-05-24

申请号：CN201410400520.1

申请日：2014-08-15

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 张宇 ,  李海 ,  刘忠华 ,  连正兴

IPC: C12N5/077

Abstract: 本发明公开了一种提高鸡骨骼肌成肌细胞分化能力的制剂及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所提供的制剂是由肌源成纤维细胞提取物、丙酮酸盐和钙盐组成。其中，肌源成纤维细胞提取物是鸡肌源成纤维细胞经超声波裂解后，分离得到小于10KDa的蛋白液经真空干燥获得的；钙盐和丙酮酸盐可为丙酮酸钙。本发明所提供的制剂具有成份简单易得、使用简便有效的特点，可显著提高鸡骨骼肌成肌细胞的融合率，促进骨骼肌纤维直径的增大及功能性收缩蛋白的表达。利用本发明提供的制剂培养成肌细胞，成肌细胞的融合率提高32.01％，肌管中的平均细胞核数提高91.63％，肌管平均直径增加45.59％。

公开(公告)号：CN104059876B

公开(公告)日：2016-08-17

申请号：CN201410273222.0

申请日：2014-06-18

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 张宇 ,  李海 ,  刘忠华 ,  连正兴

IPC: C12N5/073

Abstract: 本发明公开了一种提高鸡骨骼肌细胞氧化代谢能力的培养方法，属于生物技术领域。本发明所提供的方法是将经过分离、纯化的鸡骨骼肌成肌细胞和肌源成纤维细胞分别接种于Transwell培养皿的上室和下室，二者以1μm孔径的PET膜分开但共享添加有H2O2的成肌分化培养基；经过成肌分化诱导培养7?10天获得具有自主收缩能力的肌管，期间每隔8?12小时进行1次低温冲击刺激。本发明提供的方法能够显著提高鸡骨骼肌细胞的线粒体含量及其跨膜电位和有氧代谢酶的活性，同时降低了ATPase的活性。该方法具有培养周期短、效果稳定的特点，为研究鸡骨骼肌能量代谢规律、纤维类型形成机制等奠定了基础，具有良好的研究及应用价值。

公开(公告)号：CN103589730B

公开(公告)日：2015-10-21

申请号：CN201310562508.6

申请日：2013-11-13

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 刘忠华 ,  仇有文 ,  孔庆然 ,  黄天晴

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。通过与具有IRS2基因的质粒载体进行连接，本发明还提供了一种具有同时敲低猪源IRS1和IRS2基因表达的shRNA干扰载体。猪肝脏细胞IRS基因表达实验的结果显示，shRNA干扰载体分别将猪的IRS1基因和IRS2基因敲低了78%和64%。同时，IRS基因表达水平的敲低对猪肝脏细胞的糖脂代谢产生影响，提高了猪肝脏细胞的血糖浓度。本发明不仅为构建2型糖尿病模型猪奠定基础，还对如何提高猪血糖浓度进行了有益探索。

公开(公告)号：CN103589730A

公开(公告)日：2014-02-19

申请号：CN201310562508.6

申请日：2013-11-13

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 孔庆然 ,  黄天晴 ,  刘忠华

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。通过与具有IRS2基因的质粒载体进行连接，本发明还提供了一种具有同时敲低猪源IRS1和IRS2基因表达的shRNA干扰载体。猪肝脏细胞IRS基因表达实验的结果显示，shRNA干扰载体分别将猪的IRS1基因和IRS2基因敲低了78%和64%。同时，IRS基因表达水平的敲低对猪肝脏细胞的糖脂代谢产生影响，提高了猪肝脏细胞的血糖浓度。本发明不仅为构建2型糖尿病模型猪奠定基础，还对如何提高猪血糖浓度进行了有益探索。