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公开(公告)号:CN103602682B
公开(公告)日:2015-09-09
申请号:CN201310562507.1
申请日:2013-11-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用,属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。本发明还提供了一种抑制IRS2基因表达的shRNA干扰载体。根据克隆经对比分析后的猪源IRS2基因保守序列,合成带有BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点干扰片段,并将干扰片段连接到经过BamH Ⅰ和HindⅢ线性化的质粒载体上,经筛选后获得有效干扰载体。本发明提供的shRNA及其干扰载体,能够有效抑制IRS2基因的表达,影响细胞的糖脂代谢,为2型糖尿病模型猪的构建奠定基础。
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公开(公告)号:CN104357483A
公开(公告)日:2015-02-18
申请号:CN201410613163.7
申请日:2014-11-04
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种提高猪细胞重编程能力的方法及应用,属于细胞移植和胚胎发育技术领域。本发明所提供的方法是在获取并培养猪卵母细胞和猪胎儿成纤维细胞后,进行体细胞核移植,最后进行iPS诱导并进行碱性磷酸酶染色。方法中利用小分子药物GSK126进行了处理,其使用方式有以下三种:1)猪胎儿成纤维细胞在核移植前利用小分子药物GSK126进行处理;2)在猪胎儿成纤维细胞体细胞核移植后,利用小分子药物GSK126处理融合胚胎;3)用于iPS诱导的猪胎儿成纤维细胞,在培养成熟后接种前利用小分子药物GSK126进行处理。本发明所提供的方法可以显著提高克隆胚胎的发育率和iPS诱导效率,提高幅度分别达到44.7%和111.3%。
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公开(公告)号:CN103602682A
公开(公告)日:2014-02-26
申请号:CN201310562507.1
申请日:2013-11-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS2基因表达的shRNA及应用,属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。本发明还提供了一种抑制IRS2基因表达的shRNA干扰载体。根据克隆经对比分析后的猪源IRS2基因保守序列,合成带有BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点干扰片段,并将干扰片段连接到经过BamH Ⅰ和HindⅢ线性化的质粒载体上,经筛选后获得有效干扰载体。本发明提供的shRNA及其干扰载体,能够有效抑制IRS2基因的表达,影响细胞的糖脂代谢,为2型糖尿病模型猪的构建奠定基础。
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公开(公告)号:CN101956003A
公开(公告)日:2011-01-26
申请号:CN201010251752.7
申请日:2010-08-12
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 猪基因组中外源基因整合位点的检测方法,本发明涉及外源基因整合位点的检测方法。本发明解决了现有外源基因整合位点的检测方法操作复杂,误差较大的问题。方法:一、分别针对TgInS1、TgInS2和TgInS3外源基因插入基因组中的位点进行PCR扩增;二、电泳检测,即实现了猪基因组中外源基因整合位点的检测。本发明的方法操作简单,且与现有的外源基因整合位点的检测方法相比较,人为误差小,检测结果准确。
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公开(公告)号:CN103468705A
公开(公告)日:2013-12-25
申请号:CN201310409326.5
申请日:2013-09-10
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪印迹基因Slc22a3,属于分子遗传学领域。本发明通过克隆获得Slc22a3基因,并通过比较36头亲本猪耳组织测序结果发现Slc22a3的第10外显子第20个碱基存在SNP突变,进一步应用该位点鉴定Slc22a3基因的印迹状态。本发明所公开的猪印迹基因Slc22a3,丰富了猪印迹基因的数量,为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息,可用于以猪作为动物模型研究人类Slc22a3基因异常疾病。
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公开(公告)号:CN101886075A
公开(公告)日:2010-11-17
申请号:CN201010215527.8
申请日:2010-07-02
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/09
Abstract: 本发明公布了猪ROSA26启动子序列及其应用,根据鼠,牛,人中ROSA26位点的序列比对得到保守序列,根据保守序列设计引物扩增得到猪内源ROSA26启动子;得到的ROSA26启动子用于外源基因的GFP的表达,GFP蛋白在猪中得到广泛稳定的表达,可解决转基因猪外源基因表达的不稳定性以及位置效应的不可预知性,为工业化生产提供了可能。
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公开(公告)号:CN103589730B
公开(公告)日:2015-10-21
申请号:CN201310562508.6
申请日:2013-11-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用,属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。通过与具有IRS2基因的质粒载体进行连接,本发明还提供了一种具有同时敲低猪源IRS1和IRS2基因表达的shRNA干扰载体。猪肝脏细胞IRS基因表达实验的结果显示,shRNA干扰载体分别将猪的IRS1基因和IRS2基因敲低了78%和64%。同时,IRS基因表达水平的敲低对猪肝脏细胞的糖脂代谢产生影响,提高了猪肝脏细胞的血糖浓度。本发明不仅为构建2型糖尿病模型猪奠定基础,还对如何提高猪血糖浓度进行了有益探索。
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公开(公告)号:CN103589730A
公开(公告)日:2014-02-19
申请号:CN201310562508.6
申请日:2013-11-13
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种抑制IRS1基因表达的shRNA及应用,属于基因工程技术领域。本发明提供的shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。通过与具有IRS2基因的质粒载体进行连接,本发明还提供了一种具有同时敲低猪源IRS1和IRS2基因表达的shRNA干扰载体。猪肝脏细胞IRS基因表达实验的结果显示,shRNA干扰载体分别将猪的IRS1基因和IRS2基因敲低了78%和64%。同时,IRS基因表达水平的敲低对猪肝脏细胞的糖脂代谢产生影响,提高了猪肝脏细胞的血糖浓度。本发明不仅为构建2型糖尿病模型猪奠定基础,还对如何提高猪血糖浓度进行了有益探索。
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公开(公告)号:CN103468706A
公开(公告)日:2013-12-25
申请号:CN201310409327.X
申请日:2013-09-10
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪印迹基因Slc22a18及其应用,属于分子遗传学领域。通过PCR、序列比较发现该猪Slc22a18基因第4外显子79位碱基存在SNP位点,进一步应用该位点鉴定Slc22a18基因的印迹状态。本发明所公开的猪印迹基因Slc22a18,丰富了猪印迹基因的数量,为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息,可用于以猪作为动物模型研究人类Slc22a18基因异常疾病。
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