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公开(公告)号：CN102220367A
公开(公告)日：2011-10-19
申请号：CN201110105395.8
申请日：2011-04-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及通过超量达yerP基因提高枯草杆菌抗菌肽产量的方法，属于生物技术领域。本方法首先以枯草芽孢杆菌ATCC9943为出发菌株，以大肠杆菌克隆载体pHCMC04为骨架构建一个基因超量表达载体pHCMC-YerP，通过电转化将其转入到枯草杆菌ATCC9943中使yerP基因超量表达，构建了一个高产抗菌肽菌株FMB45。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产surfactin和fengycin的能力大大提高。
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公开(公告)号：CN102174558A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201110071211.0
申请日：2011-03-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及通过敲除abrB基因提高枯草杆菌抗菌肽产量的方法，属于生物技术领域。本方法首先以枯草芽孢杆菌ATCC9943为出发菌株，以大肠杆菌克隆载体pGEM-T为骨架构建一个基因敲除载体pAbrB-Cm，利用同源重组原理，通过双交换过程敲除枯草芽孢杆菌ATCC9943基因组abrB基因的方法构建了一个高产抗菌肽菌株FMB29。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产surfactin和fengycin的能力大大提高，并通过质谱鉴定了改良菌体FMB29发酵产物中surfactin和fengycin的存在。
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公开(公告)号：CN102094054A
公开(公告)日：2011-06-15
申请号：CN201010576515.8
申请日：2010-12-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在仔猪饲料中的应用，属于饲料添加剂和生物技术领域。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)fmbJ种子培养基扩大培养后，2~5%接种，28～35℃，5000L发酵罐液体深层发酵30～48h，然后提取，喷雾干燥生产抗菌脂肽产品。这种抗菌脂肽按照4000IU/kg添加至仔猪基础日料中，提高了饲料利用率，并对促进仔猪生长发育、预防仔猪腹泻和提高仔猪免疫力均有较好的效果。本发明菌株枯草芽孢杆菌为安全的微生物，其抗菌产物安全性高。另外与目前仔猪饲料中使用的黄霉素相比，具有更好的效果，对取代饲料抗生素添加和保障食品安全具有重要意义。
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公开(公告)号：CN101643740B
公开(公告)日：2011-06-01
申请号：CN200910184504.2
申请日：2009-08-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及鱼腥藻PCC7120脂肪氧合酶基因，属于食品工业生物技术领域。该基因来源于鱼腥藻(Anabaena sp.PCC 7120)，通过PCR从基因组DNA中扩增获得，插入表达载体后转化大肠杆菌，诱导表达，表达出的重组酶催化不饱和脂肪酸的氧化，生成共轭双键的脂肪酸氢过氧化衍生物。氢过氧化物作为不稳定的初级酶促产物可进一步发生一系列氧化次级反应，在面粉品质改良中在以下两个方面具有重要应用价值：(1)氧化具有还原性的半胱氨酸，形成二硫键，应用于面粉品质改良，提高面筋强度，替代具有致癌作用的溴酸钾；(2)氧化色素类物质，应用于面粉的漂白，替代过氧化苯甲酰。
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公开(公告)号：CN102021164A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN201010535809.6
申请日：2010-11-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种无抗生素抗性标记的枯草芽孢杆菌构建方法及筛选靶基因失活的枯草芽孢杆菌的方法。本方法首先以枯草芽孢杆菌168为出发菌株，构建两个同源交换片段，利用同源重组原理，通过两次双交换过程构建了一个可调控的赖氨酸营养缺陷型菌株BS-PS。以大肠杆菌克隆载体pMD19-T为骨架构建了通用型整合突变载体PLC，以枯草芽孢杆菌中性蛋白酶nprE为失活靶基因，采用插入失活策略，以PLC为基础，构建了插入失活nprE的整合载体PLC-InprE，转化入BS-PS，通过一次单交换，以及一次自发单交换过程，以控制赖氨酸的合成为筛选标记结合PCR验证结果，对蛋白酶插入失活的突变菌株进行筛选。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101985625A
公开(公告)日：2011-03-16
申请号：CN201010535839.7
申请日：2010-11-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于食品工业生物技术领域，涉及一种陆生伊萨酵母乙醛脱氢酶基因及其表达载体。该基因序列为SEQ ID NO.16，其开放阅读框序列为SEQ IDNO.17，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.18。将其插入表达载体后转化大肠杆菌，IPTG诱导表达。表达出的重组酶可催化乙醛氧化生成乙酸。本发明提供了一种新型、高活性的乙醛脱氢酶基因，利用本发明基因，实现在大肠杆菌中的重组表达，克服了发酵陆生伊萨酵母(Issatchenkia terricola XJ-2)生产乙醛脱氢酶产量低的缺点，可提供大量的乙醛脱氢酶进行解酒制品的研究；并且为构建安全的乙醛脱氢酶基因工程菌奠定了基础。
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公开(公告)号：CN101173258B
公开(公告)日：2010-08-18
申请号：CN200710132677.0
申请日：2007-09-18
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种普通变形杆菌脂肪酶突变体及其应用，属于生物技术领域。该普通变形杆菌脂肪酶突变体是将野生型变形杆菌脂肪酶的氨基酸残基序列进行突变后得到的蛋白质：1)第102位的缬氨酸突变为异亮氨酸；2)第197位的甘氨酸突变为丝氨酸；3)第229位的精氨酸突变为组氨酸。编码普通变形杆菌脂肪酶突变体的全长基因，其序列为SEQ IDNO.1，长861bp。表达产物重组脂肪酶，分子量为31.5kDa。突变脂肪酶在制备生物柴油方面的应用，可高效地催化制备生物柴油。该脂肪酶突变体酶活性高，反应条件温和，在食品加工、生物柴油及洗涤用品添加剂中有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN101643740A
公开(公告)日：2010-02-10
申请号：CN200910184504.2
申请日：2009-08-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及鱼腥藻PCC7120脂肪氧合酶基因，属于食品工业生物技术领域。该基因来源于鱼腥藻(Anabaena sp.PCC 7120)，通过PCR从基因组DNA中扩增获得，插入表达载体后转化大肠杆菌，诱导表达，表达出的重组酶催化不饱和脂肪酸的氧化，生成共轭双键的脂肪酸氢过氧化衍生物。氢过氧化物作为不稳定的初级酶促产物可进一步发生一系列氧化次级反应，在面粉品质改良中具有以下两个方面具有重要应用价值：(1)氧化具有还原性的半胱氨酸，形成二硫键，应用于面粉品质改良，提高面筋强度，替代具有致癌作用的溴酸钾；(2)氧化色素类物质，应用于面粉的漂白，替代过氧化苯甲酰。
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公开(公告)号：CN100379874C
公开(公告)日：2008-04-09
申请号：CN200610037888.1
申请日：2006-01-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12P21/02 , A23K1/16 , A23L3/3463 , C12R1/07
CPC classification number: Y02P60/877
Abstract: 本发明涉及了一种抗菌肽的生产方法和产品，它是通过利用淀粉液化芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ES-2菌株，种子培养基扩大培养后，2%接种，28～35℃，进行液体深层发酵30～48h，或接种于固体发酵培养基，经28～37℃培养2～4天后，提取，浓缩，吸附、干燥。本发明抗菌肽产品，分子量分别为994、1008、1022、1036和1449、1463、1477、1491Da，它们是抗菌脂肽surfactin和fengycin两类同系物的混合物，纯品为黄色粘稠物，能耐受100℃30min的加热，在pH2-12活性不丧失，对细菌、真菌具有广谱的抗菌活性、耐热性能好，据文献报道不易产生耐药性，利用此方法生产成本低、工艺相对简单，可作为食品防腐剂和饲料添加剂。
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公开(公告)号：CN101063144A
公开(公告)日：2007-10-31
申请号：CN200710022222.3
申请日：2007-05-10
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种乳酸菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及应用，属于食品工业生物技术领域。该基因来自唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus thermophilus)，长1380bp。通过PCR从基因组DNA中扩增获得，在该基因两端分别加上NcoI和EcoRI限制酶识别序列，与经相同限制酶消化的pET－DsbA连接并转化大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3)pLysS，实现了在大肠杆菌中的重组表达，表达产物谷氨酸脱羧酶分子量为52.4kDa。重组酶可将L－谷氨酸脱羧转化为γ－氨基丁酸。该基因的表达为γ－氨基丁酸的酶法合成提供大量的、高活力的粗酶，降低酶法合成γ－氨基丁酸的成本。这种γ－氨基丁酸的合成方法属于生物合成法，反应条件温和，作用专一，无副产物，在食品、医药、饲料等行业中均有应用价值。
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