公开(公告)号：CN112553134B

公开(公告)日：2022-09-06

申请号：CN202011601201.9

申请日：2020-12-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  姚动邦 ,  张康 ,  宿玲恰

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/57 ,  C12N9/28 ,  C12N15/75 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中表达α‑淀粉酶的方法，属于基因工程以及生物工程技术领域。本发明通过敲除枯草芽孢杆菌WS9基因组上的hrcA基因，获得了枯草芽孢杆菌基因工程WHS9；通过优化Sec分泌系统元件，发现共表达编码Sec分泌系统中膜转运通道的主要成分SecYEG的基因最有利于α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的重组表达；通过筛选到的信号肽平衡了α‑淀粉酶在枯草芽孢杆菌WHS9中的整个分泌过程，最终获得的枯草芽孢杆菌重组菌WHS9GSAB经摇瓶培养后胞外α‑淀粉酶活性为2835.1U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外α‑淀粉酶活性可高达35779.5U/mL。

公开(公告)号：CN112301015B

公开(公告)日：2022-03-04

申请号：CN202011208395.6

申请日：2020-11-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  黄燕

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种利用角质酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法，属于生物工程、酶工程、微生物工程技术领域。本发明采用角质酶突变体和目标蛋白在枯草芽孢杆菌中共表达，目标蛋白包括木糖异构酶、4,6‑α‑葡萄糖基转移酶、4‑α‑糖基转移酶、海藻糖合酶和分支酶等，可实现胞内定位目标蛋白胞外表达，提高生产效率、简化后提取工艺，具有较高的学术意义和应用价值。

公开(公告)号：CN111394330B

公开(公告)日：2022-03-04

申请号：CN202010365351.8

申请日：2018-12-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  杜立

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54

Abstract: 本发明公开了环糊精葡萄糖基转移酶突变体T168A及其制备方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过对环糊精葡萄糖基转移酶进行突变，得到了环糊精葡萄糖基转移酶歧化活力更高的突变体。突变体T168A的摇瓶发酵酶歧化活力分别为野生酶的1.21倍。本发明对环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高了该酶的在食品、医药、化工行业中的应用潜力。

公开(公告)号：CN111394329B

公开(公告)日：2022-03-04

申请号：CN202010365349.0

申请日：2018-12-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  杜立

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54

Abstract: 本发明公开了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体T171A及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过对环糊精葡萄糖基转移酶进行突变，得到了环糊精葡萄糖基转移酶歧化活力更高的突变体。突变体T171A的摇瓶发酵酶歧化活力分别为野生酶的1.22倍。本发明对环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高了该酶的在食品、医药、化工行业中的应用潜力。

公开(公告)号：CN111411097B

公开(公告)日：2022-02-15

申请号：CN202010365353.7

申请日：2018-12-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  杜立

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体S90G，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过对环糊精葡萄糖基转移酶进行突变，得到了环糊精葡萄糖基转移酶歧化活力更高的突变体。突变体S90G的摇瓶发酵酶歧化活力分别为野生酶的1.21倍。本发明对环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高了该酶的在食品、医药、化工行业中的应用潜力。

公开(公告)号：CN111518790B

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN202010299008.8

申请日：2018-11-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  郭志勇 ,  李玲玲 ,  姚锴琳

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种蔗糖水解酶，属于基因工程和酶工程领域。本发明对来源于Xanthomonas axonopodispv.glycines、Janthinobacterium agaricidamnosum NBRC 102515、Caulobacter crescentus NA1000 CB15的蔗糖水解酶进行改造，分别对其第271位或第279位或第281位的丝氨酸残基进行定点突变，获得的单突变体酶的转苷活性较野生型蔗糖水解酶升高。这一发明有助于对于糖苷水解酶转苷和水解机理的研究，亦可应用于糖苷水解酶工业生产多聚糖。

公开(公告)号：CN108707633B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN201810570061.X

申请日：2018-06-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  封金云

IPC: C12P19/12

Abstract: 本发明公开了一种多酶复配生产海藻糖的方法及其应用，属于酶技术领域。本发明利用角质酶、芽寡糖基海藻糖合成酶和芽寡糖基海藻糖水解酶进行多酶复配提高底物利用率，从而降低海藻糖的生产成本，利用本发明的方法以20wt％淀粉溶液为底物合成海藻糖的转化率达到55％，而普通双酶法以20wt％淀粉溶液为底物合成海藻糖转化率为50％左右。

公开(公告)号：CN108384740B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN201810145577.X

申请日：2018-02-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  李云菲

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种用于高密度发酵的枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明采用CRISPR/Cas9基因编辑系统，敲除枯草芽孢杆菌WSH11和CICIM B0629的ppsE、sfp这两个基因，得到突变菌株WSH13和CICIM2。制备枯草芽孢杆菌WSH11、WSH13、CICIM和CICIM24种菌感受态，转化环糊精葡萄糖基转移酶表达质粒，得到4种环糊精葡萄糖基转移酶重组菌，经过摇瓶和3‑L罐上罐测定酶活和发酵过程中产泡沫的情况，结果表明以CICIM2为宿主时环糊精葡萄糖基转移酶的表达稍有下降，且发酵过程中，泡沫产量减少不显著。以WSH13为宿主时环糊精葡萄糖基转移酶的表达较好，且发酵过程中，泡沫产量明显减少。

公开(公告)号：CN109022396B

公开(公告)日：2021-03-30

申请号：CN201811002140.7

申请日：2018-08-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  姚动邦

IPC: C12N9/28 ,  C12N15/56 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12P19/14 ,  C12P19/04 ,  C12P19/02 ,  C12P19/12 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的α‑淀粉酶突变体及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的突变体是通过将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸或将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸或同时将将出发氨基酸序列为SEQ ID NO.1的α‑淀粉酶的第82位氨基酸由赖氨酸突变为谷氨酸以及第405位氨基酸由丝氨酸突变为精氨酸得到的；将以编码本发明的突变体的基因为目的基因、以pHY300PLK为表达载体、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5为表达宿主构建得到的重组枯草芽孢杆菌工程菌发酵48h，可使得发酵液中α‑淀粉酶的酶活提高至474.7U/mL。

公开(公告)号：CN110592060B

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN201910853825.0

申请日：2017-09-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  姚锴琳

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12P19/24 ,  C12P19/12

Abstract: 本发明公开了酶活提高的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明提供了一系列酶活提高的麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体。突变体G586D、F284V/G586D、F284V/T439A/G586D麦芽寡糖基海藻糖合成酶的酶活分别为野生酶的1.4倍、2.4倍、3.4倍。