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公开(公告)号：CN102094054B
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201010576515.8
申请日：2010-12-07
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在仔猪饲料中的应用，属于饲料添加剂和生物技术领域。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)fmbJ种子培养基扩大培养后，2～5%接种，28～35℃，5000L发酵罐液体深层发酵30～48h，然后提取，喷雾干燥生产抗菌脂肽产品。这种抗菌脂肽按照4000IU/kg添加至仔猪基础日料中，提高了饲料利用率，并对促进仔猪生长发育、预防仔猪腹泻和提高仔猪免疫力均有较好的效果。本发明菌株枯草芽孢杆菌为安全的微生物，其抗菌产物安全性高。另外与目前仔猪饲料中使用的黄霉素相比，具有更好的效果，对取代饲料抗生素添加和保障食品安全具有重要意义。
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公开(公告)号：CN102242142B
公开(公告)日：2012-10-24
申请号：CN201110105407.7
申请日：2011-04-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及通过敲除phrC基因提高枯草杆菌抗菌肽产量的方法，属于生物技术领域。本方法首先以枯草芽孢杆菌ATCC9943为出发菌株，以大肠杆菌克隆载体pGEM-T为骨架构建一个基因敲除载体pCSF-EM，利用同源重组原理，通过双交换过程敲除枯草芽孢杆菌ATCC9943基因组phrC基因的方法构建了一个高产抗菌肽菌株FMB25。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产surfactin和fengycin的能力大大提高。
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公开(公告)号：CN102559622A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201210027230.8
申请日：2012-02-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于食品工业生物技术领域，涉及一种利用枯草杆菌高效生产重组脂肪氧合酶的方法。该方法包括如下步骤：(1)构建鱼腥藻脂肪氧合酶重组枯草杆菌基因工程菌；(2)将所述的鱼腥藻脂肪氧合酶重组枯草杆菌基因工程菌接种于装液量为58-63mL/250mL的加入15-18g/L乳糖的LB培养基中，27-30℃、180rpm条件下培养85-90h，离心收集上清液。在该最佳条件下，重组脂肪氧合酶活达到167.32U/mL，为其大规模的生产提供一定的指导。
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公开(公告)号：CN102533838A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201210027253.9
申请日：2012-02-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于食品工业生物技术领域，涉及一种高效分泌表达重组脂肪氧合酶的枯草杆菌表达载体及其应用。本发明以枯草杆菌载体pHB201骨架，先通过酶切方法改造pHB201酶切位点，获得pHB-hc载体，在此计基础上通过PCR的方法枯草杆菌168基因组中克隆获得组成型强启动子P43，组成型启动子PamyE，Sec途径的分子伴侣PrsA以及中性蛋白酶信号肽SnprB，构建获得了枯草杆菌分泌型表达载体pHBSR。将从鱼腥藻基因组DNA中扩增获得脂肪氧合酶基因，插入到自主构建的表达载体pHBSR后，电转化如枯草杆菌宿主WB800，实现了重组脂肪氧合酶的分泌表达，发酵液中最大酶活达到76U/ml。
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公开(公告)号：CN102220367B
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201110105395.8
申请日：2011-04-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及通过超量达yerP基因提高枯草杆菌抗菌肽产量的方法，属于生物技术领域。本方法首先以枯草芽孢杆菌ATCC9943为出发菌株，以大肠杆菌克隆载体pHCMC04为骨架构建一个基因超量表达载体pHCMC-YerP，通过电转化将其转入到枯草杆菌ATCC9943中使yerP基因超量表达，构建了一个高产抗菌肽菌株FMB45。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产surfactin和fengycin的能力大大提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102242142A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201110105407.7
申请日：2011-04-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及通过敲除phrC基因提高枯草杆菌抗菌肽产量的方法，属于生物技术领域。本方法首先以枯草芽孢杆菌ATCC9943为出发菌株，以大肠杆菌克隆载体pGEM-T为骨架构建一个基因敲除载体pCSF-EM，利用同源重组原理，通过双交换过程敲除枯草芽孢杆菌ATCC9943基因组phrC基因的方法构建了一个高产抗菌肽菌株FMB25。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产surfactin和fengycin的能力大大提高。
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公开(公告)号：CN102220366A
公开(公告)日：2011-10-19
申请号：CN201110105392.4
申请日：2011-04-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及通过超量表达comA基因提高枯草杆菌抗菌肽产量的方法，属于生物技术领域。本方法首先以枯草芽孢杆菌ATCC9943为出发菌株，以整合载体pDK为骨架构建一个基因超量表达载体pDK-ComA，利用同源重组原理，通过双交换过程将comA基因整合到枯草芽孢杆菌ATCC9943基因组的方法构建了一个高产抗菌肽菌株FMB27。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产surfactin和fengycin的能力大大提高。
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公开(公告)号：CN101402959B
公开(公告)日：2010-12-01
申请号：CN200810235133.1
申请日：2008-11-14
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种提高枯草芽孢杆菌surfactin产量的启动子置换方法，属于生物技术领域。采用DNA同源整合技术使启动子Pspac置换枯草芽孢杆菌fmbR surfactin合成酶基因本身的启动子。通过PCR方法从fmbR菌株基因组中扩增得到1081bp的同源序列，连接到质粒pMUTIN4的HindIII和BamH I酶切位点上，并将构建好的载体转化到野生枯草芽孢杆菌fmbR中，经过抗生素培养基筛选并通过分子生物学方法鉴定获得。本发明方法可以直接从遗传上改良抗菌肽生产菌株，在工业上具潜在的应用价值。菌株surfactin产量提高约4.85倍，在IPTG诱导下，surfactin产量约提高10倍。
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公开(公告)号：CN101892275A
公开(公告)日：2010-11-24
申请号：CN201010224746.2
申请日：2010-07-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12P17/04
Abstract: 本发明涉及脂肪酶催化猪油合成抗坏血酸脂肪酸酯的方法，属于生物催化领域。以天然动物油脂-猪油和L-抗坏血酸为原料，非水体系中脂肪酶催化猪油和甲醇进行醇解反应制备复合脂肪酸甲酯，然后再催化复合脂肪酸甲酯与L-抗坏血酸进行转酯化反应制备抗坏血酸脂肪酸酯。该方法在反应介质中，以固定化酶作为催化剂，酶用量为12～20％，底物比率1∶2～11，反应温度50～55℃，反应时间20～32h，然后将反应液经过滤、洗涤、萃取或硅胶柱分离、低压真空干燥等步骤制备L-抗坏血酸脂肪酸酯。本发明的方法利用廉价的猪油作为反应底物，能在较短的反应时间内获得高的转化率，从而降低了生产成本，有利于工业化生产。
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公开(公告)号：CN101063144B
公开(公告)日：2010-09-15
申请号：CN200710022222.3
申请日：2007-05-10
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及一种乳酸菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及应用，属于食品工业生物技术领域。该基因来自唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus thermophilus)，长1380bp。通过PCR从基因组DNA中扩增获得，在该基因两端分别加上NcoI和EcoRI限制酶识别序列，与经相同限制酶消化的pET-DsbA连接并转化大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3)pLysS，实现了在大肠杆菌中的重组表达，表达产物谷氨酸脱羧酶分子量为52.4kDa。重组酶可将L-谷氨酸脱羧转化为γ-氨基丁酸。该基因的表达为γ-氨基丁酸的酶法合成提供大量的、高活力的粗酶，降低酶法合成γ-氨基丁酸的成本。这种γ-氨基丁酸的合成方法属于生物合成法，反应条件温和，作用专一，无副产物，在食品、医药、饲料等行业中均有应用价值。
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