抗A亚群禽白血病病毒的细胞系及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN104560865A

    公开(公告)日:2015-04-29

    申请号:CN201410831496.7

    申请日:2014-12-25

    Abstract: 本发明公开了一种抗A亚群禽白血病病毒的细胞系及其构建方法与应用,属于农业生物技术领域。本发明中所述的抗A亚群禽白血病病毒的细胞系,命名为抗ALV-A鸡胚成纤维细胞系DF-1/A;保藏于中国典型培养物保藏中心;保藏地址为中国武汉武汉大学;保藏编号为CCTCC NO:C2014180;保藏起始日期为2014年10月15日;所述的抗A亚群禽白血病病毒的细胞系应用于A亚群禽白血病病毒的诊断。本发明所得到的抗A亚群禽白血病病毒的细胞系可以稳定传代,长期保存;利用ALV超感染的特性,可以有助于准确鉴别ALV的亚群分类,可应用于A亚群禽白血病病毒的诊断。

    利用pFastBacDual杆状病毒表达PCV2Cap蛋白的方法

    公开(公告)号:CN102839195A

    公开(公告)日:2012-12-26

    申请号:CN201210248620.8

    申请日:2012-07-18

    Abstract: 本发明公开了一种利用pFast Bac Dual杆状病毒表达PCV2Cap蛋白的方法,该方法包括以下步骤:扩增带有His标签的编码PCV 2 Cap蛋白的基因片段;将上述基因片段连接到pFast Bac Dual质粒上,获得重组转移质粒pFast Bac-p10-ORF2-pH-ORF2;将重组转移质粒转化大肠杆菌DH10Bac,经蓝白斑筛选后得到重组穿梭载体Bac-p10-ORF2-pH-ORF2;将重组穿梭载体转染昆虫细胞,获得重组杆状病毒Ac.Dual-Cap;将重组杆状病毒接毒于昆虫细胞,培养后收集昆虫细胞,将表达产物纯化后得到重组Cap蛋白。本发明方法解决了Cap蛋白在真核细胞中表达量低的难题。本发明方法重组的Cap蛋白设计有His标签,利于其后续的纯化,并且其生物活性优于原核表达系统所表达的Cap蛋白,可以应用于流行病学诊断方法的建立及PCV2亚单位疫苗的研发。

    一种基于DNA水平的乙型脑炎病毒复制子载体系统及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN102250950A

    公开(公告)日:2011-11-23

    申请号:CN201110135709.9

    申请日:2011-05-25

    Abstract: 本发明公开了一种基于DNA水平的乙型脑炎病毒复制子载体系统及其构建方法和应用。本发明是利用RT-PCR和融合PCR的方法,以改造过的低拷贝质粒pOKM为骨架,在缺失绝大部分结构基因(第165-2402核苷酸)的情况下,构建包括CMV启动子、5’UTR、C蛋白N端的前23个氨基酸(C23)、E蛋白C端的25个氨基酸(E25)、所有非结构蛋白、3’UTR、核酶(HDVr)和polyA序列的基于DNA水平的JEV复制子载体系统。为了检测构建的JEV复制子能否表达外源基因,构建含有报告基因EGFP的质粒pJEV-REP-GFP-IRES与pJEV-REP-GFP。

    鸡痘病毒双基因表达载体(PT7.5N)

    公开(公告)号:CN101220375B

    公开(公告)日:2011-07-27

    申请号:CN200710062632.0

    申请日:2007-01-11

    Abstract: 本发明提供了一种鸡痘病毒双基因表达载体,其具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列,包括启动子P7.5、LacZ基因、位于LacZ基因上的多克隆位点、稀有酶切位点Not1、鸡痘病毒DNA同源臂TK1和TK2、KanR抗性标记基因、复制起点(ori),以及连接区段。本发明构建的双基因表达载体,最大限度地减少了载体长度,从而可以容纳更大的外源基因;增加了可用酶切位点数量,方便克隆不同的外源基因;对插入位点Not1处的启动子不作限定,可以自由选择与外源基因搭配的启动子,从而提高了表达效率,并且,采用反式表达的方法,从而提高了外源基因的表达效率。

    鸡痘病毒双基因表达载体(PG7.5N)

    公开(公告)号:CN101220374A

    公开(公告)日:2008-07-16

    申请号:CN200710062631.6

    申请日:2007-01-11

    Abstract: 本发明提供了一种鸡痘病毒双基因表达载体,其具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列,包括启动子P7.5、LacZ基因、位于LacZ基因上的多克隆位点、稀有酶切位点Not1、鸡痘病毒DNA同源臂F11L1和F11L2、AmpR抗性标记基因、复制起点(ori)。本发明构建的双基因表达载体,最大限度地减少了载体长度,从而可以容纳更大的外源基因;增加了可用酶切位点数量,方便克隆不同的外源基因;对插入位点Not1处的启动子不作限定,可以自由选择与外源基因搭配的启动子,从而提高了表达效率,并且,采用反式表达的方法,从而提高了外源基因的表达效率。

    一种大片段DNA克隆载体的构建方法

    公开(公告)号:CN101195830A

    公开(公告)日:2008-06-11

    申请号:CN200710032964.4

    申请日:2007-12-28

    Abstract: 本发明公开了一种简单快捷构建克隆载体的方法,简称LJY法和用此方法已构建好的4个克隆载体。本发明以pBR322的AmpR基因和ori复制起始点为骨架,通过独特的引物设计方法和平端连接,可简单快速地在新构建的克隆载体质粒中引入所需的限制性内切酶识别位点,并有效地提高载体的外源基因容量和稳定性,避免大片段基因克隆时常出现的目的基因意外突变等问题。

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