公开(公告)号：CN101220375A

公开(公告)日：2008-07-16

申请号：CN200710062632.0

申请日：2007-01-11

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 任涛 ,  孙令辰 ,  江经伟 ,  郁宏伟 ,  廖明

IPC: C12N15/863 ,  A61K31/7088 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明提供了一种鸡痘病毒双基因表达载体，其具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，包括启动子P7.5、LacZ基因、位于LacZ基因上的多克隆位点、稀有酶切位点Not 1、鸡痘病毒DNA同源臂TK1和TK2、KanR抗性标记基因、复制起点(ori)，以及连接区段。本发明构建的双基因表达载体，最大限度地减少了载体长度，从而可以容纳更大的外源基因；增加了可用酶切位点数量，方便克隆不同的外源基因；对插入位点Not1处的启动子不作限定，可以自由选择与外源基因搭配的启动子，从而提高了表达效率，并且，采用反式表达的方法，从而提高了外源基因的表达效率。

公开(公告)号：CN101220374B

公开(公告)日：2012-02-01

申请号：CN200710062631.6

申请日：2007-01-11

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 廖明 ,  江经伟 ,  孔令辰 ,  郁宏伟 ,  任涛

IPC: C12N15/863 ,  A61K48/00 ,  A61K31/7088

Abstract: 本发明提供了一种鸡痘病毒双基因表达载体，其具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，包括启动子P7.5、LacZ基因、位于LacZ基因上的多克隆位点、稀有酶切位点Not1、鸡痘病毒DNA同源臂F11L1和F11L2、AmpR抗性标记基因、复制起点(ori)。本发明构建的双基因表达载体，最大限度地减少了载体长度，从而可以容纳更大的外源基因；增加了可用酶切位点数量，方便克隆不同的外源基因；对插入位点Not1处的启动子不作限定，可以自由选择与外源基因搭配的启动子，从而提高了表达效率，并且，采用反式表达的方法，从而提高了外源基因的表达效率。

公开(公告)号：CN101195830B

公开(公告)日：2011-12-28

申请号：CN200710032964.4

申请日：2007-12-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 廖明 ,  江经纬 ,  郁宏伟 ,  周燕芬

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种简单快捷构建克隆载体的方法，简称LJY法和用此方法已构建好的4个克隆载体。本发明以pBR322的AmpR基因和ori复制起始点为骨架，通过独特的引物设计方法和平端连接，可简单快速地在新构建的克隆载体质粒中引入所需的限制性内切酶识别位点，并有效地提高载体的外源基因容量和稳定性，避免大片段基因克隆时常出现的目的基因意外突变等问题。

公开(公告)号：CN101220375B

公开(公告)日：2011-07-27

申请号：CN200710062632.0

申请日：2007-01-11

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 任涛 ,  孙令辰 ,  江经伟 ,  郁宏伟 ,  廖明

IPC: C12N15/863 ,  A61K31/7088 ,  A61K48/00

Abstract: 本发明提供了一种鸡痘病毒双基因表达载体，其具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，包括启动子P7.5、LacZ基因、位于LacZ基因上的多克隆位点、稀有酶切位点Not1、鸡痘病毒DNA同源臂TK1和TK2、KanR抗性标记基因、复制起点(ori)，以及连接区段。本发明构建的双基因表达载体，最大限度地减少了载体长度，从而可以容纳更大的外源基因；增加了可用酶切位点数量，方便克隆不同的外源基因；对插入位点Not1处的启动子不作限定，可以自由选择与外源基因搭配的启动子，从而提高了表达效率，并且，采用反式表达的方法，从而提高了外源基因的表达效率。

公开(公告)号：CN101220374A

公开(公告)日：2008-07-16

申请号：CN200710062631.6

申请日：2007-01-11

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 廖明 ,  江经伟 ,  孔令辰 ,  郁宏伟 ,  任涛

IPC: C12N15/863 ,  A61K48/00 ,  A61K31/7088

Abstract: 本发明提供了一种鸡痘病毒双基因表达载体，其具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，包括启动子P7.5、LacZ基因、位于LacZ基因上的多克隆位点、稀有酶切位点Not1、鸡痘病毒DNA同源臂F11L1和F11L2、AmpR抗性标记基因、复制起点(ori)。本发明构建的双基因表达载体，最大限度地减少了载体长度，从而可以容纳更大的外源基因；增加了可用酶切位点数量，方便克隆不同的外源基因；对插入位点Not1处的启动子不作限定，可以自由选择与外源基因搭配的启动子，从而提高了表达效率，并且，采用反式表达的方法，从而提高了外源基因的表达效率。

公开(公告)号：CN101195830A

公开(公告)日：2008-06-11

申请号：CN200710032964.4

申请日：2007-12-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 廖明 ,  江经纬 ,  郁宏伟 ,  周燕芬

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种简单快捷构建克隆载体的方法，简称LJY法和用此方法已构建好的4个克隆载体。本发明以pBR322的AmpR基因和ori复制起始点为骨架，通过独特的引物设计方法和平端连接，可简单快速地在新构建的克隆载体质粒中引入所需的限制性内切酶识别位点，并有效地提高载体的外源基因容量和稳定性，避免大片段基因克隆时常出现的目的基因意外突变等问题。