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公开(公告)号：CN104531630B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN104672318A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201410775687.6
申请日：2014-12-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种人白细胞介素-29(hIL-29)第43位赖氨酸定点突变为亮氨酸的重组变异体(rhIL-29M)及其制备方法，属于生物技术领域。本发明具体方法为：1)设计合成IL-29变异体的特异性引物及突变引物；2)用特异性引物及突变引物对hIL-29编码基因第127、128位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)用含1％(v/v)甲醇的培养液诱导培养酵母工程菌；5)用SP-Sepharose Fast Flow层析柱从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的重组酵母工程菌可高密度发酵并表达肽链第43位赖氨酸突变为亮氨酸的rhIL-29变异体，适用于工业化制备rhIL-29变异体。
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公开(公告)号：CN104531729A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410758084.5
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种阿魏酸酯酶A热稳定性改造、突变阿魏酸酯酶A工程菌构建以及突变阿魏酸酯酶A高效异源表达的方法。根据来源于A.usamii E001阿魏酸酯酶A(AuFaeA)的空间结构设计突变A126C和N152C，得到突变阿魏酸酯酶A：AuFaeAA126C-N152C，其成熟肽基因序列为SEQ ID NO:1，C126和C152可以形成一个二硫键。实验结果表明突变后该酶热稳定性有了明显的提高，为其它酶的改造提供新的技术路径，作为一种耐热型的酶制剂，该阿魏酸酯酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104531728A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410755394.1
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的一种环氧化物水解酶cDNA基因序列的克隆方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，命名为Aueh1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2，该酶命名为AuEH1。本发明还公开了AuEH1工程菌的构建以及重组AuEH1的异源表达和活性测定的方法。以20mM消旋体环氧苯乙烷为底物，重组AuEH1工程菌全细胞催化，获得(S)-SO的对映体过量率ee>94％。AuEH1具有较高的催化活性和手性选择性，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN104531630A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/14 , C12Y303/02003
Abstract: 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104407129A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410756205.2
申请日：2014-12-12
Applicant: 江南大学
IPC: G01N33/543
CPC classification number: G01N33/6869 , G01N2333/7155
Abstract: 本发明提供了一种检测发酵液中重组人白细胞介素-29活性的间接ELISA方法，用于基因工程菌株发酵条件优化过程中简便、快速检测发酵液中表达产物rhIL-29的活性。检测方法包括以下步骤：将表达rhIL-29的基因工程菌株的发酵液上清用包被液稀释后，直接包被酶标反应板，经37℃孵育3h、4℃过夜；洗板三次，加入封闭液37℃孵育3h：洗板三次，加入羊抗人IL-29抗体37℃孵育30min；洗板三次，加入HRP标记的兔抗羊IgG，37℃孵育30min；洗板三次，加入TMB底物，37℃显色10min；加终止液终止反应，在A450波长测定OD值。本发明的检测方法适用于基因工程菌株发酵条件优化过程中检测发酵液中表达产物的活性，根据不同发酵条件下测得的发酵液OD450值，可判定该基因工程菌株的最佳发酵条件。
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公开(公告)号：CN104404066A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410758070.3
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种天然二硫键与阿魏酸酯酶A功能相关性的验证方法，以及突变阿魏酸酯酶A工程菌构建、突变酶异源表达的方法。根据来源于A.usamii E001阿魏酸酯酶A(AuFaeA)的模拟空间结构设计单突变C29T、C91T和C234T，得到突变阿魏酸酯酶A：AuFaeAC29T、AuFaeAC91T和AuFaeAC234T，其成熟肽基因序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5。突变后该酶的酶活性和最适温度都有大幅下降，证明了二硫键是影响阿魏酸酯酶A功能发挥的关键因素，为其它与AuFaeA一级结构相似的A类阿魏酸酯酶的耐热性改造奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104404015A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410758722.3
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2494 , C07K2319/00 , C12Y302/01078
Abstract: 本发明提出了一种新型地利用计算机技术与生物信息学方法对宇佐美曲霉Aus Man5A分子进行理性设计，并结合基因工程技术构建一种底物亲和力强、催化效率高的AusMan5A-CBM27融合酶的方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，氨基酸序列为SEQ ID NO:2，相应的基因命名为man5A-cbm27。本发明还公开了融合酶工程菌的构建以及高效表达和纯化的方法，制备的融合酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性，具有较大的工业化应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104402988A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410756203.3
申请日：2014-12-12
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C07K14/54
Abstract: 本发明提供了一种人白细胞介素-29(hIL-29)成熟肽第33位赖氨酸定点突变为精氨酸的重组hIL-29变异体(rhIL-29L)及其制备方法，属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤：1)人工设计合成hIL-29成熟肽的上下游引物和定点突变引物；2)用上下游引物及突变引物对hIL-29成熟肽编码基因第98位碱基进行定点突变；3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体，转化毕赤酵母，获得重组酵母工程菌；4)培养重组酵母工程菌，于培养液添加1.5％(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体；5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的重组酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达rhIL-29L，适用于工业化制备rhIL-29成熟肽变异体。
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公开(公告)号：CN104388451A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410758941.1
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明为耐热木聚糖酶(Xyl11M)基因的合成及其在毕赤酵母中的表达，涉及一种来源于嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的耐热β-1,4-内切木聚糖酶(Xyl11M)在毕赤酵母中表达、活性测定及酶学性质分析方法。其基因命名为xyl11M，它的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，编码的蛋白质为Xyl11M，氨基酸序列为SEQ ID NO:2。所制备的重组酶的活性为157U/mL；其最适反应温度为70℃，70℃下保温60min，残余酶活为98％，表明该酶热稳定性非常好；其最适pH为6.0，在pH 5.0～8.0范围内较稳定；金属离子对该酶活性影响较小。作为一种耐热型的酶制剂，该酶具有较大的工业化应用潜力及经济价值。
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