公开(公告)号：CN102703487A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210093071.1

申请日：2012-03-31

Applicant: 黑龙江大学

Inventor： 葛菁萍 ,  高冬妮 ,  宋刚 ,  凌宏志 ,  平文祥 ,  楼庄伟 ,  唐晓艳 ,  金丽颖 ,  安琪 ,  叶磊

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/866

Abstract: HA-NDV-F基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前新城疫的病毒疫苗存在成本高的问题。方法：一、以pNDV-F-T为模板PCR扩增，目的片段进行TA克隆及连接，得pTYL-HA-F，酶切得HA-F片段；二、六种质粒分别单酶切及去磷酸化处理，然后进行纯化；三、连接后得六种重组转移载体；四、转化感受态细胞，经提取后得Bacmid-YL；五、转染sf9细胞，得六种重组杆状病毒即完成。本发明利用杆状病毒表达系统，使其直接在中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1内表达HA-F抗原蛋白；为制备鸡新城疫基因工程疫苗奠定了基础，以此制备的新城疫病毒疫苗成本可有效降低。

公开(公告)号：CN102618579A

公开(公告)日：2012-08-01

申请号：CN201210093043.X

申请日：2012-03-31

Applicant: 黑龙江大学

Inventor： 葛菁萍 ,  高冬妮 ,  宋刚 ,  凌宏志 ,  平文祥 ,  楼庄伟 ,  唐晓艳 ,  金丽颖 ,  安琪 ,  田兆峰

IPC: C12N15/866 ,  C12N15/66

Abstract: HA-VP2基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前杆状病毒介导的外源基因在CHO细胞中的表达率较低的问题。方法：一、以pMD18-T-VP2为模板进行PCR扩增，获得目的片段进行TA克隆及载体连接，得pTZF-HA-VP2；二、九种质粒和pTZF-HA-VP2分别进行双酶切，酶切后的目的片段进行连接，得九种重组转移载体；三、九种重组转移载体分别转化感受态细胞，经提取后得rBac-TZF-X；四、rBac-TZF-X转染sf9细胞，得rBV-TZF-X即完成。本发明添加调控元件WPRE可以提高杆状病毒介导外源基因在CHO细胞中的表达率。

公开(公告)号：CN102618580A

公开(公告)日：2012-08-01

申请号：CN201210093206.4

申请日：2012-03-31

Applicant: 黑龙江大学

Inventor： 葛菁萍 ,  高冬妮 ,  宋刚 ,  凌宏志 ,  平文祥 ,  楼庄伟 ,  唐晓艳 ,  安琪 ,  金丽颖

IPC: C12N15/866 ,  C12N15/66

Abstract: 具有CMV启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法，涉及可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法。方法：酶切pcDNA3.1(-)；酶切pFastBac1；二者连接得pFastBac1-pcDNA3.1(-)；pEGFP-C3进行扩增，产物经纯化后于T-Vector连接得pMD-EGFP；pFastBac1-pcDNA3.1(-)和pMD-EGFP分别酶切，再连接，得pFastBac1-pcDNA3.1(-)-EGFP；制Bacmid-EGFP；转染sf9细胞，得CN-EGFP即完成。本发明首次利用杆状病毒表达载体系统在OL细胞中导入并表达外源基因，拓宽了杆状病毒可转导的哺乳动物细胞范围。