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公开(公告)号：CN102533861A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201210012796.3
申请日：2012-01-16
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66
Abstract: 具有CBA启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法，涉及一种具有CBA启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法。解决现有重组杆状病毒介导的基因表达效率低的问题。方法：依次构建pMD18-T-GV、pFastBac1-GV、pGM18-T-pHGV、pMD18-T-CBA、pFastBac[pH-]-pHBOX、pSD-CBA、pSD、pSD-L-ITR和pSD-ITRs；构建pMD18-T-EGFP；构建pSD-EGFP；构建pSD-ITRs-EGFP；转化DH10Bac细胞，获得重组载体；转染，获得重组杆状病毒。经过修饰改造的重组杆状病毒所介导的EGFP基因的表达效率明显增强。
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公开(公告)号：CN100503817C
公开(公告)日：2009-06-24
申请号：CN200610009656.5
申请日：2006-01-23
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/866 , A61K39/12
Abstract: 一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法，它涉及一种重组杆状病毒的制备方法。它为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。其制备方法：(一)构建含有CMV-IE启动子的载体；(二)构建带有CMV-IE启动子和外源基因的重组载体；(三)构建重组杆状病毒，收集病毒粒子测定病毒效价；(四)检测重组杆状病毒外源基因的表达；步骤(三)包括1.重组载体转化DH10Bac细胞；2.提取重组杆状病毒BacmidDNA；3.PCR扩增Bacmid DNA；4.Bacmid DNA转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒；5.扩增重组杆状病毒；6.蚀斑试验；7.蚀斑纯化；8.收集重组杆状病毒粒子；9.测定重组杆状病毒效价。本发明为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。
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公开(公告)号：CN102533862A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201210012811.4
申请日：2012-01-16
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66
Abstract: EGFP基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及EGFP基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。是要解决目前重组杆状病毒质粒载体转导效率低、表达效率较工业生产要求差距大、表达时间短等问题。方法；一、PCR扩增EF1α基因；二、构建质粒pT-EF1α；三、构建质粒pWK；四、PCR扩增L-ITR基因，构建pWK-L-ITR；五、PCR扩增R-ITR基因，构建pWK-ITR；六、PCR扩增EGFP基因，构建EGFP基因重组杆状病毒表达载体pWK-ITR-EGFP。本发明通过添加VSV-GED、WPRE和ITR元件，增强了外源基因的表达效率，增强了病毒的转导效率，延长了表达时间。
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公开(公告)号：CN1594547A
公开(公告)日：2005-03-16
申请号：CN200410043719.X
申请日：2004-07-16
Applicant: 黑龙江大学
Abstract: HD34－1菌株的构建及以其为发酵菌株酿造无醇啤酒的方法，它涉及一种基因工程菌株的构建及无醇啤酒的酿造方法。HD34－1是这样构建的：a.设计5′端、3′端引物；b.扩增ADH基因；c.与表达载体pYC6/CT连接；d.转化进入Saccharomyces cerevisiae HD34；e.初筛转化子，获得HD34－1菌株，以其为发酵菌株酿造无醇啤酒的方法如下：a.活化菌株；b.将菌种转到培养基中摇瓶培养；c.将扩培菌种接种到含有麦芽汁的发酵罐中；d.充氧、发酵；e.测量糖度，当糖度降到5°BX时停止发酵；f.降温，放置一周后即可出罐。本发明的菌株能催化伯醇和醛的正反应，降低乙醇产量，简化生产工艺。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102618580A
公开(公告)日：2012-08-01
申请号：CN201210093206.4
申请日：2012-03-31
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66
Abstract: 具有CMV启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法，涉及可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法。方法：酶切pcDNA3.1(-)；酶切pFastBac1；二者连接得pFastBac1-pcDNA3.1(-)；pEGFP-C3进行扩增，产物经纯化后于T-Vector连接得pMD-EGFP；pFastBac1-pcDNA3.1(-)和pMD-EGFP分别酶切，再连接，得pFastBac1-pcDNA3.1(-)-EGFP；制Bacmid-EGFP；转染sf9细胞，得CN-EGFP即完成。本发明首次利用杆状病毒表达载体系统在OL细胞中导入并表达外源基因，拓宽了杆状病毒可转导的哺乳动物细胞范围。
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公开(公告)号：CN1807602A
公开(公告)日：2006-07-26
申请号：CN200610009656.5
申请日：2006-01-23
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/866 , A61K39/12
Abstract: 一种可用于制作禽类疫苗的重组杆状病毒的制备方法，它涉及一种重组杆状病毒的制备方法。它为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。其制备方法：(一)构建含有CMV－IE启动子的载体；(二)构建带有CMV－IE启动子和外源基因的重组载体；(三)构建重组杆状病毒，收集病毒粒子测定病毒效价；(四)检测重组杆状病毒外源基因的表达；步骤(三)包括1.重组载体转化DH10Bac细胞；2.提取重组杆状病毒BacmidDNA；3.PCR扩增Bacmid DNA；4.Bacmid DNA转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒；5.扩增重组杆状病毒；6.蚀斑试验；7.蚀斑纯化；8.收集重组杆状病毒粒子；9.测定重组杆状病毒效价。本发明为制作出可防治禽类传染性疾病的重组杆状病毒疫苗奠定了物质基础。
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公开(公告)号：CN102703487A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210093071.1
申请日：2012-03-31
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/66 , C12N15/866
Abstract: HA-NDV-F基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前新城疫的病毒疫苗存在成本高的问题。方法：一、以pNDV-F-T为模板PCR扩增，目的片段进行TA克隆及连接，得pTYL-HA-F，酶切得HA-F片段；二、六种质粒分别单酶切及去磷酸化处理，然后进行纯化；三、连接后得六种重组转移载体；四、转化感受态细胞，经提取后得Bacmid-YL；五、转染sf9细胞，得六种重组杆状病毒即完成。本发明利用杆状病毒表达系统，使其直接在中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1内表达HA-F抗原蛋白；为制备鸡新城疫基因工程疫苗奠定了基础，以此制备的新城疫病毒疫苗成本可有效降低。
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公开(公告)号：CN102618579A
公开(公告)日：2012-08-01
申请号：CN201210093043.X
申请日：2012-03-31
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66
Abstract: HA-VP2基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前杆状病毒介导的外源基因在CHO细胞中的表达率较低的问题。方法：一、以pMD18-T-VP2为模板进行PCR扩增，获得目的片段进行TA克隆及载体连接，得pTZF-HA-VP2；二、九种质粒和pTZF-HA-VP2分别进行双酶切，酶切后的目的片段进行连接，得九种重组转移载体；三、九种重组转移载体分别转化感受态细胞，经提取后得rBac-TZF-X；四、rBac-TZF-X转染sf9细胞，得rBV-TZF-X即完成。本发明添加调控元件WPRE可以提高杆状病毒介导外源基因在CHO细胞中的表达率。
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公开(公告)号：CN1325632C
公开(公告)日：2007-07-11
申请号：CN200410043719.X
申请日：2004-07-16
Applicant: 黑龙江大学
Abstract: HD34-1菌株的构建及以其为发酵菌株酿造无醇啤酒的方法，它涉及一种基因工程菌株的构建及无醇啤酒的酿造方法。HD34-1是这样构建的：a、设计5′端、3′端引物；b、扩增ADH基因；c、与表达载体pYC6/CT连接；d、转化进入Saccharomyces cerevisiae HD34；e、初筛转化子，获得HD34-1菌株，以其为发酵菌株酿造无醇啤酒的方法如下：a.活化菌株；b.将菌种转到培养基中摇瓶培养；c.将扩培菌种接种到含有麦芽汁的发酵罐中；d.充氧、发酵；e.测量糖度，当糖度降到5°BX时停止发酵；f.降温，放置一周后即可出罐。本发明的菌株能催化伯醇和醛的正反应，降低乙醇产量，简化生产工艺。
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