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公开(公告)号：CN105754957B
公开(公告)日：2020-06-12
申请号：CN201610081479.5
申请日：2016-02-04
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/866 , A61K39/145 , A61P31/16 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种防治禽流感H5N1的重组杆状病毒疫苗的制备方法，具体涉及一种表达禽流感病毒血凝素HA基因的重组H5N1病毒疫苗株及其制备方法，具体包含以下步骤：1)pS‑ITRs‑HA质粒的构建，2)pS‑ITRs‑HA质粒转化E.coli DH10 Bac，3)重组杆状病毒穿梭载体转染Sf9昆虫细胞，4)重组杆状病毒的扩增。制备获得的重组H5N1病毒疫苗株对免疫鸡的血清进行免疫检测，免疫鸡血清中IgG抗体的水平最高可达0.966，IL‑2、IL‑4和IFN‑γ的浓度最高可分别达到89.67ng/L、80.21ng/L和64.24ng/L，以上结果表明重组杆状病毒疫苗可有效的刺激鸡体同时产生体液免疫和细胞免疫，为鸡群提供了双重免疫保护作用，本发明为基于杆状病毒的禽流感疫苗的研发奠定理论基础。
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公开(公告)号：CN109651320A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201910069244.8
申请日：2019-01-24
Applicant: 黑龙江大学
Abstract: 2-芳基苯并吡喃酮类黄酮衍生物的合成方法，它涉及一种化合物的合成方法，适用于含有不同取代基的2-芳基苯并吡喃酮类黄酮衍生物的合成。本发明为了解决现有酮类黄酮衍生物的合成方法产率低、反应周期长、后处理比较繁琐、操作难度高的技术问题。本方法如下：一、制备β-丙二酮化合物；二、制备黄酮化合物2-芳基苯并吡喃酮。本发明将酯化、重排一步完成，简单实用，减少了反应的中间环节，节省了中间产物的分离与提纯，提高了原料的利用率，降低反应温度、在微波辐射下缩短反应时间，减少溶剂使用量，后处理相对简单，收率相对较高且无副产物。且在含有少量水存在时也能反应，反应易于操作，适合工业化生产。本发明属于化合物合成的技术领域。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102703487A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210093071.1
申请日：2012-03-31
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/66 , C12N15/866
Abstract: HA-NDV-F基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前新城疫的病毒疫苗存在成本高的问题。方法：一、以pNDV-F-T为模板PCR扩增，目的片段进行TA克隆及连接，得pTYL-HA-F，酶切得HA-F片段；二、六种质粒分别单酶切及去磷酸化处理，然后进行纯化；三、连接后得六种重组转移载体；四、转化感受态细胞，经提取后得Bacmid-YL；五、转染sf9细胞，得六种重组杆状病毒即完成。本发明利用杆状病毒表达系统，使其直接在中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1内表达HA-F抗原蛋白；为制备鸡新城疫基因工程疫苗奠定了基础，以此制备的新城疫病毒疫苗成本可有效降低。
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公开(公告)号：CN102618579A
公开(公告)日：2012-08-01
申请号：CN201210093043.X
申请日：2012-03-31
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66
Abstract: HA-VP2基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前杆状病毒介导的外源基因在CHO细胞中的表达率较低的问题。方法：一、以pMD18-T-VP2为模板进行PCR扩增，获得目的片段进行TA克隆及载体连接，得pTZF-HA-VP2；二、九种质粒和pTZF-HA-VP2分别进行双酶切，酶切后的目的片段进行连接，得九种重组转移载体；三、九种重组转移载体分别转化感受态细胞，经提取后得rBac-TZF-X；四、rBac-TZF-X转染sf9细胞，得rBV-TZF-X即完成。本发明添加调控元件WPRE可以提高杆状病毒介导外源基因在CHO细胞中的表达率。
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公开(公告)号：CN105754957A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201610081479.5
申请日：2016-02-04
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/866 , A61K39/145 , A61P31/16 , C12R1/93
CPC classification number: C12N7/00 , A61K39/12 , C07K14/005 , C12N15/86 , C12N2710/14021 , C12N2710/14043 , C12N2760/16122 , C12N2760/16134 , C12N2800/107 , C12N2800/60 , C12N2840/105 , C12N2840/60
Abstract: 本发明涉及一种防治禽流感H5N1的重组杆状病毒疫苗的制备方法，具体涉及一种表达禽流感病毒血凝素HA基因的重组H5N1病毒疫苗株及其制备方法，具体包含以下步骤：1)pS?ITRs?HA质粒的构建，2)pS?ITRs?HA质粒转化E.coli DH10 Bac，3)重组杆状病毒穿梭载体转染Sf9昆虫细胞，4)重组杆状病毒的扩增。制备获得的重组H5N1病毒疫苗株对免疫鸡的血清进行免疫检测，免疫鸡血清中IgG抗体的水平最高可达0.966，IL?2、IL?4和IFN?γ的浓度最高可分别达到89.67ng/L、80.21ng/L和64.24ng/L，以上结果表明重组杆状病毒疫苗可有效的刺激鸡体同时产生体液免疫和细胞免疫，为鸡群提供了双重免疫保护作用，本发明为基于杆状病毒的禽流感疫苗的研发奠定理论基础。
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公开(公告)号：CN109651320B
公开(公告)日：2023-01-13
申请号：CN201910069244.8
申请日：2019-01-24
Applicant: 黑龙江大学(CN)
Abstract: 2‑芳基苯并吡喃酮类黄酮衍生物的合成方法，它涉及一种化合物的合成方法，适用于含有不同取代基的2‑芳基苯并吡喃酮类黄酮衍生物的合成。本发明为了解决现有酮类黄酮衍生物的合成方法产率低、反应周期长、后处理比较繁琐、操作难度高的技术问题。本方法如下：一、制备β‑丙二酮化合物；二、制备黄酮化合物2‑芳基苯并吡喃酮。本发明将酯化、重排一步完成，简单实用，减少了反应的中间环节，节省了中间产物的分离与提纯，提高了原料的利用率，降低反应温度、在微波辐射下缩短反应时间，减少溶剂使用量，后处理相对简单，收率相对较高且无副产物。且在含有少量水存在时也能反应，反应易于操作，适合工业化生产。本发明属于化合物合成的技术领域。
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公开(公告)号：CN102618580A
公开(公告)日：2012-08-01
申请号：CN201210093206.4
申请日：2012-03-31
Applicant: 黑龙江大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/66
Abstract: 具有CMV启动子的可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法，涉及可表达EGFP的重组杆状病毒的构建方法。方法：酶切pcDNA3.1(-)；酶切pFastBac1；二者连接得pFastBac1-pcDNA3.1(-)；pEGFP-C3进行扩增，产物经纯化后于T-Vector连接得pMD-EGFP；pFastBac1-pcDNA3.1(-)和pMD-EGFP分别酶切，再连接，得pFastBac1-pcDNA3.1(-)-EGFP；制Bacmid-EGFP；转染sf9细胞，得CN-EGFP即完成。本发明首次利用杆状病毒表达载体系统在OL细胞中导入并表达外源基因，拓宽了杆状病毒可转导的哺乳动物细胞范围。
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