公开(公告)号：CN102703487A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210093071.1

申请日：2012-03-31

Applicant: 黑龙江大学

Inventor： 葛菁萍 ,  高冬妮 ,  宋刚 ,  凌宏志 ,  平文祥 ,  楼庄伟 ,  唐晓艳 ,  金丽颖 ,  安琪 ,  叶磊

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/866

Abstract: HA-NDV-F基因重组杆状病毒表达载体的构建方法，涉及基因重组杆状病毒表达载体的构建方法。它解决了目前新城疫的病毒疫苗存在成本高的问题。方法：一、以pNDV-F-T为模板PCR扩增，目的片段进行TA克隆及连接，得pTYL-HA-F，酶切得HA-F片段；二、六种质粒分别单酶切及去磷酸化处理，然后进行纯化；三、连接后得六种重组转移载体；四、转化感受态细胞，经提取后得Bacmid-YL；五、转染sf9细胞，得六种重组杆状病毒即完成。本发明利用杆状病毒表达系统，使其直接在中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1内表达HA-F抗原蛋白；为制备鸡新城疫基因工程疫苗奠定了基础，以此制备的新城疫病毒疫苗成本可有效降低。