公开(公告)号：CN101591622B

公开(公告)日：2011-01-19

申请号：CN200910104221.2

申请日：2009-06-30

Applicant: 重庆大学

Inventor： 胡宗利 ,  刘志昭 ,  陈国平 ,  邓磊 ,  潘宇 ,  胡廷章 ,  涂昀

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12P21/02 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种蜂毒肽基因裂殖酵母工程菌及其构建方法和应用，该工程菌是由蜂毒肽基因裂殖酵母重组表达载体转化的裂殖酵母；其构建方法包括构建蜂毒肽基因裂殖酵母重组表达载体、用蜂毒肽基因裂殖酵母重组表达载体转化裂殖酵母共2个步骤；应用该工程菌生产蜂毒肽的方法包括蜂毒肽的表达、蜂毒肽的分离纯化共2个步骤；操作简便易行，蜂毒肽表达水平高、易于分离纯化、活性强，生产周期短，成本低，弥补了现有蜂毒肽制备方法以及原核表达系统和其它酵母表达系统的不足，可以在降低蜂毒肽对宿主细胞致死性的同时保证蜂毒肽的天然构象和活性，解决蜂毒肽提取纯化困难、合成成本过高等问题，从而为蜂毒肽的基础研究和生产应用提供有力的工具。

公开(公告)号：CN101407812A

公开(公告)日：2009-04-15

申请号：CN200810069952.3

申请日：2008-07-09

Applicant: 重庆大学

Inventor： 陈国平 ,  胡宗利 ,  邓晓洁 ,  刘志昭 ,  顾峰

IPC: C12N15/19 ,  C12N15/81 ,  C07K14/52 ,  A61K38/19 ,  A61P19/02 ,  A61P29/00 ,  A61P37/06 ,  A61P9/00 ,  A61P35/00 ,  A61P31/18

Abstract: 本发明涉及一种具有趋化作用的人类RANTES蛋白的异源表达和纯化方法。采用具有高表达、高稳定、高分泌和低成本的毕赤酵母表达体系，通过RT－PCR克隆人RANTES基因、人RANTES融合蛋白表达载体构建、人RANTES融合蛋白的甲醇诱导表达以及纯化鉴定等分子生物学技术和蛋白表达与纯化技术，实现人RANTES蛋白的分泌表达。为了便于人RANTES蛋白的分离纯化，在目的蛋白N端融合一个6×His纯化标签，并在His－tag和RANTES蛋白之间加入肠激酶(EK)酶切位点构建RANTES融合蛋白，然后通过亲和层析和EK酶切得到纯度较高、产量较大的人RANTES蛋白，该蛋白可用于制备治疗多发性硬化关节炎、类风湿性关节炎、器官移植排斥、心脑血管疾病、肿瘤以及HIV药物的用途。

公开(公告)号：CN101407812B

公开(公告)日：2011-11-16

申请号：CN200810069952.3

申请日：2008-07-09

Applicant: 重庆大学

Inventor： 陈国平 ,  胡宗利 ,  邓晓洁 ,  刘志昭 ,  顾峰

IPC: C12N15/19 ,  C12N15/81 ,  C07K14/52 ,  A61K38/19 ,  A61P19/02 ,  A61P29/00 ,  A61P37/06 ,  A61P9/00 ,  A61P35/00 ,  A61P31/18

Abstract: 本发明涉及一种具有趋化作用的人类RANTES蛋白的异源表达和纯化方法。采用具有高表达、高稳定、高分泌和低成本的毕赤酵母表达体系，通过RT-PCR克隆人RANTES基因、人RANTES融合蛋白表达载体构建、人RANTES融合蛋白的甲醇诱导表达以及纯化鉴定等分子生物学技术和蛋白表达与纯化技术，实现人RANTES蛋白的分泌表达。为了便于人RANTES蛋白的分离纯化，在目的蛋白N端融合一个6×His纯化标签，并在His-tag和RANTES蛋白之间加入肠激酶(EK)酶切位点构建RANTES融合蛋白，然后通过亲和层析和EK酶切得到纯度较高、产量较大的人RANTES蛋白，该蛋白可用于制备治疗多发性硬化关节炎、类风湿性关节炎、器官移植排斥、心脑血管疾病、肿瘤以及HIV药物的用途。

公开(公告)号：CN101591622A

公开(公告)日：2009-12-02

申请号：CN200910104221.2

申请日：2009-06-30

Applicant: 重庆大学

Inventor： 胡宗利 ,  刘志昭 ,  陈国平 ,  邓磊 ,  潘宇 ,  胡廷章 ,  涂昀

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12P21/02 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种蜂毒肽基因裂殖酵母工程菌及其构建方法和应用，该工程菌是由蜂毒肽基因裂殖酵母重组表达载体转化的裂殖酵母；其构建方法包括构建蜂毒肽基因裂殖酵母重组表达载体、用蜂毒肽基因裂殖酵母重组表达载体转化裂殖酵母共2个步骤；应用该工程菌生产蜂毒肽的方法包括蜂毒肽的表达、蜂毒肽的分离纯化共2个步骤；操作简便易行，蜂毒肽表达水平高、易于分离纯化、活性强，生产周期短，成本低，弥补了现有蜂毒肽制备方法以及原核表达系统和其它酵母表达系统的不足，可以在降低蜂毒肽对宿主细胞致死性的同时保证蜂毒肽的天然构象和活性，解决蜂毒肽提取纯化困难、合成成本过高等问题，从而为蜂毒肽的基础研究和生产应用提供有力的工具。

公开(公告)号：CN101285066A

公开(公告)日：2008-10-15

申请号：CN200810069723.1

申请日：2008-05-22

Applicant: 重庆大学

Inventor： 胡宗利 ,  杨妤欣 ,  陈国平 ,  陈绪清 ,  王翊 ,  刘志昭

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/81 ,  C07K14/47 ,  C07K19/00 ,  C07K1/14 ,  C07K1/22

Abstract: 本发明公开了一种异源表达和纯化人细胞膜上葡萄糖转运蛋白家族成员GLUT1、GLUT2、GLUT3的方法，其步骤为：构建诱导型融合蛋白表达载体GST－GLUT1、GST－GLUT2、GST－GLUT3并转化裂殖酵母；鉴定裂殖酵母转化子；GST－GLUT1、GST－GLUT2、GST－GLUT3三种融合蛋白在裂殖酵母中的诱导表达；确认GLUT1、GLUT2、GLUT3基因在裂殖酵母中得到表达；分离和纯化上述三种融合蛋白；检测和鉴定分离纯化的上述三种融合蛋白；从上述三种融合蛋白中的分别分离和纯化人类GLUT1、GLUT2、GLUT3蛋白。本发明的方法可以应用于在裂殖酵母中表达高等动植物的膜蛋白，并且获得的蛋白质具有翻译后的修饰作用和生物活性。