公开(公告)号：CN103616502A

公开(公告)日：2014-03-05

申请号：CN201310413981.8

申请日：2013-09-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 沈锡辉 ,  王瑶 ,  崔博宇 ,  宋云洪 ,  王铁涛 ,  刘应保 ,  司美茹

IPC: G01N33/53

CPC classification number: C12Q1/6818 ,  C12Q2565/101 ,  C12Q2565/601

Abstract: 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白克隆到MCS处；产生BRET信号的模式体；检测三个BRET模式体的荧光素酶的荧光强度；选择三个荧光强度值都较强的模式体作为BRET信号产生的荧光供体；通过生物荧光显微镜(Leica)检测荧光蛋白的表达情况，选择合适的荧光受体；通过荧光分光光度计检测BRET模式体的信号。本发明通过细菌荧光素酶luxAB作为检测两蛋白互作的荧光供体与eYFP作为荧光受体产生BRET信号，构建BRET模型，该系统可以在体内检测两个蛋白的动态互作，提高了检测蛋白质相互作用的准确性，作为检测原核细胞内蛋白质互作的较理想系统。

公开(公告)号：CN103616502B

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201310413981.8

申请日：2013-09-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 沈锡辉 ,  王瑶 ,  崔博宇 ,  宋云洪 ,  王铁涛 ,  刘应保 ,  司美茹

IPC: G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白克隆到MCS处；产生BRET信号的模式体；检测三个BRET模式体的荧光素酶的荧光强度；选择三个荧光强度值都较强的模式体作为BRET信号产生的荧光供体；通过生物荧光显微镜(Leica)检测荧光蛋白的表达情况，选择合适的荧光受体；通过荧光分光光度计检测BRET模式体的信号。本发明通过细菌荧光素酶luxAB作为检测两蛋白互作的荧光供体与eYFP作为荧光受体产生BRET信号，构建BRET模型，该系统可以在体内检测两个蛋白的动态互作，提高了检测蛋白质相互作用的准确性，作为检测原核细胞内蛋白质互作的较理想系统。

公开(公告)号：CN104878023A

公开(公告)日：2015-09-02

申请号：CN201510194757.3

申请日：2015-04-22

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 沈锡辉 ,  司美茹 ,  封严严 ,  王铁涛 ,  陈燦 ,  潘君风 ,  张磊 ,  王瑶

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/08 ,  C12N15/70 ,  C12R1/15

Abstract: 一个新型细菌抗逆功能基因及其表达产物与应用，所述基因的核苷酸序列如SED ID NO：1所示。本发明还包括新型细菌抗逆功能基因的表达产物分支硫醇抗氧化物酶MPx与应用。本发明之新型细菌抗逆基因可克隆到表达载体pET28a上，然后转到BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法纯化表达产物，即可得到分支硫醇抗氧化物酶MPx，该表达产物可显著提高细菌的抗逆性。实验证明，在100mM过氧化氢、11mM异丙苯-OOH和120mMLA-OOH处理下，Δmpx突变体的存活率下降约20％～35％，野生型中Pmpx的启动子活性在35mM H2O2，5.5mM异丙苯-OOH和60mMLA-OOH处理下分别提高了38.7％，44.5％和32.3％。