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公开(公告)号：CN104178463B
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201310151132.X
申请日：2013-04-27
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法，先获得目的基因；构建重组表达载体；获得含重组表达质粒的表达菌种；诱导靶蛋白的表达及蛋白的纯化；检测纯化的增强型单体细菌荧光素酶的活性。本发明利用融合型荧光素酶其独特的优势，将luxA和luxB基因异二聚体荧光素酶基因融合并经过易错PCR突变和化学随机突变，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，将其克隆到表达载体pET28a上，转化至BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法裂解细胞，纯化表达产物，得到增强型单体细菌荧光素酶，本发明的方法过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、酶活性损失小，性能稳定，具有重要的实际应用价值。
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公开(公告)号：CN104878023A
公开(公告)日：2015-09-02
申请号：CN201510194757.3
申请日：2015-04-22
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 一个新型细菌抗逆功能基因及其表达产物与应用，所述基因的核苷酸序列如SED ID NO：1所示。本发明还包括新型细菌抗逆功能基因的表达产物分支硫醇抗氧化物酶MPx与应用。本发明之新型细菌抗逆基因可克隆到表达载体pET28a上，然后转到BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法纯化表达产物，即可得到分支硫醇抗氧化物酶MPx，该表达产物可显著提高细菌的抗逆性。实验证明，在100mM过氧化氢、11mM异丙苯-OOH和120mMLA-OOH处理下，Δmpx突变体的存活率下降约20％～35％，野生型中Pmpx的启动子活性在35mM H2O2，5.5mM异丙苯-OOH和60mMLA-OOH处理下分别提高了38.7％，44.5％和32.3％。
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公开(公告)号：CN100334953C
公开(公告)日：2007-09-05
申请号：CN200310116789.9
申请日：2003-11-22
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科瑞微生物工程研究所
Abstract: 本发明属于农作物病害生物防治技术领域。涉及一种防治辣椒真菌土传病害的微生物生防活菌制剂的生产及使用方法。本制剂的主要有效成分为放线菌：利用能产生抗生素、且能在辣椒根际土壤和根内定殖的拮抗性特殊放线菌在辣椒根际土壤及辣椒根系大量繁殖抑制辣椒疫霉生长，从根源上消除辣椒疫病发生条件，解决化学农药难以解决的辣椒疫病防治难题；采用固态培养法生产，原料主要为农副产品，来源广，价格低廉；本制剂的主要防治对象为辣椒疫霉(Phytophthora.capsici)。本制剂可通过施入辣椒苗床土、移栽时蘸根等方式接入辣椒根际土壤，用量少，用法简单。使用该制剂无化学农药残留，推广应用后社会及经济效益明显。
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公开(公告)号：CN1543801A
公开(公告)日：2004-11-10
申请号：CN200310116789.9
申请日：2003-11-22
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科瑞微生物工程研究所
Abstract: 本发明属于农作物病害生物防治技术领域。涉及一种防治辣椒真菌土传病害的微生物生防活菌制剂的生产及使用方法。本制剂的主要有效成分为放线菌：利用能产生抗生素、且能在辣椒根际土壤和根内定殖的拮抗性特殊放线菌在辣椒根际土壤及辣椒根系大量繁殖抑制辣椒疫霉生长，从根源上消除辣椒疫病发生条件，解决化学农药难以解决的辣椒疫病防治难题；采用固态培养法生产，原料主要为农副产品，来源广，价格低廉；本制剂的主要防治对象为辣椒疫霉(Phytophthora.capsici)。本制剂可通过施入辣椒苗床土、移栽时蘸根等方式接入辣椒根际土壤，用量少，用法简单。使用该制剂无化学农药残留，推广应用后社会及经济效益明显。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104017753A
公开(公告)日：2014-09-03
申请号：CN201410193429.7
申请日：2014-05-09
Abstract: 本发明提供了一株可高效降解木质素的乙酸钙不动杆菌，其特征在于：乙酸钙不动杆菌AcinetobactercalcoaceticusLG-1，已在中国典型培养物保藏中心（CCTCC）登记保藏；保藏日期为2014年3月12日；编号为CCTCCM2014079。该菌对木质素具有高效降解作用，其可以在以木质素作为唯一碳源的木质素无机盐培养液中生长，且其生长曲线图显示该菌的生长效果明显高于作为阳性对照的红球菌和作为阴性对照的大肠杆菌，本菌株可应用于造纸，能源，环保等领域，利用其对碱性木质素的高效降解效率进而解决碱木质素在各行业中降解难度大的问题。
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公开(公告)号：CN103616502A
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201310413981.8
申请日：2013-09-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N33/53
CPC classification number: C12Q1/6818 , C12Q2565/101 , C12Q2565/601
Abstract: 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白克隆到MCS处；产生BRET信号的模式体；检测三个BRET模式体的荧光素酶的荧光强度；选择三个荧光强度值都较强的模式体作为BRET信号产生的荧光供体；通过生物荧光显微镜(Leica)检测荧光蛋白的表达情况，选择合适的荧光受体；通过荧光分光光度计检测BRET模式体的信号。本发明通过细菌荧光素酶luxAB作为检测两蛋白互作的荧光供体与eYFP作为荧光受体产生BRET信号，构建BRET模型，该系统可以在体内检测两个蛋白的动态互作，提高了检测蛋白质相互作用的准确性，作为检测原核细胞内蛋白质互作的较理想系统。
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公开(公告)号：CN104017753B
公开(公告)日：2017-01-11
申请号：CN201410193429.7
申请日：2014-05-09
Abstract: 本发明提供了一株可高效降解木质素的乙酸钙不动杆菌，其特征在于：乙酸钙不动杆菌Acinetobacter calcoaceticus LG-1，已在中国典型培养物保藏中心（CCTCC）登记保藏；保藏日期为2014年3月12日；编号为CCTCC M 2014079。该菌对木质素具有高效降解作用，其可以在以木质素作为唯一碳源的木质素无机盐培养液中生长，且其生长曲线图显示该菌的生长效果明显高于作为阳性对照的红球菌和作为阴性对照的大肠杆菌，本菌株可应用于造纸，能源，环保等领域，利用其对碱性木质素的高效降解效率进而解决碱木质素在各行业中降解难度大的问题。
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公开(公告)号：CN103616502B
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201310413981.8
申请日：2013-09-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N33/53
Abstract: 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白克隆到MCS处；产生BRET信号的模式体；检测三个BRET模式体的荧光素酶的荧光强度；选择三个荧光强度值都较强的模式体作为BRET信号产生的荧光供体；通过生物荧光显微镜(Leica)检测荧光蛋白的表达情况，选择合适的荧光受体；通过荧光分光光度计检测BRET模式体的信号。本发明通过细菌荧光素酶luxAB作为检测两蛋白互作的荧光供体与eYFP作为荧光受体产生BRET信号，构建BRET模型，该系统可以在体内检测两个蛋白的动态互作，提高了检测蛋白质相互作用的准确性，作为检测原核细胞内蛋白质互作的较理想系统。
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公开(公告)号：CN104178463A
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201310151132.X
申请日：2013-04-27
Applicant: 西北农林科技大学
CPC classification number: C12N9/0073 , C12Y114/14003
Abstract: 本发明公开了一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法，先获得目的基因；构建重组表达载体；获得含重组表达质粒的表达菌种；诱导靶蛋白的表达及蛋白的纯化；检测纯化的增强型单体细菌荧光素酶的活性。本发明利用融合型荧光素酶其独特的优势，将luxA和luxB基因异二聚体荧光素酶基因融合并经过易错PCR突变和化学随机突变，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，将其克隆到表达载体pET28a上，转化至BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法裂解细胞，纯化表达产物，得到增强型单体细菌荧光素酶，本发明的方法过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、酶活性损失小，性能稳定，具有重要的实际应用价值。
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