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公开(公告)号：CN103160528A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201310073405.3
申请日：2013-03-07
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。以及所述的增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB作为生物发光报告基因的应用。本发明将luxA和luxB基因融合表达后形成的单体蛋白经过易错PCR突变和化学随机突变，克隆到pBluescriptII载体中，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB。从实验结果我们看出该增强型单体细菌荧光素酶不仅可以在革兰氏阴性菌种表达出有活性的荧光蛋白而且还可以应用到革兰氏阳性菌中，是很有前景的生物发光报告基因。
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公开(公告)号：CN104017753B
公开(公告)日：2017-01-11
申请号：CN201410193429.7
申请日：2014-05-09
Abstract: 本发明提供了一株可高效降解木质素的乙酸钙不动杆菌，其特征在于：乙酸钙不动杆菌Acinetobacter calcoaceticus LG-1，已在中国典型培养物保藏中心（CCTCC）登记保藏；保藏日期为2014年3月12日；编号为CCTCC M 2014079。该菌对木质素具有高效降解作用，其可以在以木质素作为唯一碳源的木质素无机盐培养液中生长，且其生长曲线图显示该菌的生长效果明显高于作为阳性对照的红球菌和作为阴性对照的大肠杆菌，本菌株可应用于造纸，能源，环保等领域，利用其对碱性木质素的高效降解效率进而解决碱木质素在各行业中降解难度大的问题。
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公开(公告)号：CN103616502B
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201310413981.8
申请日：2013-09-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N33/53
Abstract: 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白克隆到MCS处；产生BRET信号的模式体；检测三个BRET模式体的荧光素酶的荧光强度；选择三个荧光强度值都较强的模式体作为BRET信号产生的荧光供体；通过生物荧光显微镜(Leica)检测荧光蛋白的表达情况，选择合适的荧光受体；通过荧光分光光度计检测BRET模式体的信号。本发明通过细菌荧光素酶luxAB作为检测两蛋白互作的荧光供体与eYFP作为荧光受体产生BRET信号，构建BRET模型，该系统可以在体内检测两个蛋白的动态互作，提高了检测蛋白质相互作用的准确性，作为检测原核细胞内蛋白质互作的较理想系统。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104178463A
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201310151132.X
申请日：2013-04-27
Applicant: 西北农林科技大学
CPC classification number: C12N9/0073 , C12Y114/14003
Abstract: 本发明公开了一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法，先获得目的基因；构建重组表达载体；获得含重组表达质粒的表达菌种；诱导靶蛋白的表达及蛋白的纯化；检测纯化的增强型单体细菌荧光素酶的活性。本发明利用融合型荧光素酶其独特的优势，将luxA和luxB基因异二聚体荧光素酶基因融合并经过易错PCR突变和化学随机突变，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，将其克隆到表达载体pET28a上，转化至BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法裂解细胞，纯化表达产物，得到增强型单体细菌荧光素酶，本发明的方法过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、酶活性损失小，性能稳定，具有重要的实际应用价值。
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公开(公告)号：CN104178463B
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201310151132.X
申请日：2013-04-27
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法，先获得目的基因；构建重组表达载体；获得含重组表达质粒的表达菌种；诱导靶蛋白的表达及蛋白的纯化；检测纯化的增强型单体细菌荧光素酶的活性。本发明利用融合型荧光素酶其独特的优势，将luxA和luxB基因异二聚体荧光素酶基因融合并经过易错PCR突变和化学随机突变，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，将其克隆到表达载体pET28a上，转化至BL21(DE3)菌株中表达，并用温和破碎法裂解细胞，纯化表达产物，得到增强型单体细菌荧光素酶，本发明的方法过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、酶活性损失小，性能稳定，具有重要的实际应用价值。
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公开(公告)号：CN104017753A
公开(公告)日：2014-09-03
申请号：CN201410193429.7
申请日：2014-05-09
Abstract: 本发明提供了一株可高效降解木质素的乙酸钙不动杆菌，其特征在于：乙酸钙不动杆菌AcinetobactercalcoaceticusLG-1，已在中国典型培养物保藏中心（CCTCC）登记保藏；保藏日期为2014年3月12日；编号为CCTCCM2014079。该菌对木质素具有高效降解作用，其可以在以木质素作为唯一碳源的木质素无机盐培养液中生长，且其生长曲线图显示该菌的生长效果明显高于作为阳性对照的红球菌和作为阴性对照的大肠杆菌，本菌株可应用于造纸，能源，环保等领域，利用其对碱性木质素的高效降解效率进而解决碱木质素在各行业中降解难度大的问题。
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公开(公告)号：CN103160528B
公开(公告)日：2014-06-11
申请号：CN201310073405.3
申请日：2013-03-07
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO：1所示。以及所述的增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB作为生物发光报告基因的应用。本专利将luxA和luxB基因融合表达后形成的单体蛋白经过易错PCR突变和化学随机突变，克隆到pBluescriptII载体中，筛选得到9个荧光强度增强的突变体，然后经过shuffling技术，得到一个增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB。从实验结果我们看出该增强型单体细菌荧光素酶不仅可以在革兰氏阴性菌种表达出有活性的荧光蛋白而且还可以应用到革兰氏阳性菌中，是很有前景的生物发光报告基因。
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公开(公告)号：CN103616502A
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201310413981.8
申请日：2013-09-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N33/53
CPC classification number: C12Q1/6818 , C12Q2565/101 , C12Q2565/601
Abstract: 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白克隆到MCS处；产生BRET信号的模式体；检测三个BRET模式体的荧光素酶的荧光强度；选择三个荧光强度值都较强的模式体作为BRET信号产生的荧光供体；通过生物荧光显微镜(Leica)检测荧光蛋白的表达情况，选择合适的荧光受体；通过荧光分光光度计检测BRET模式体的信号。本发明通过细菌荧光素酶luxAB作为检测两蛋白互作的荧光供体与eYFP作为荧光受体产生BRET信号，构建BRET模型，该系统可以在体内检测两个蛋白的动态互作，提高了检测蛋白质相互作用的准确性，作为检测原核细胞内蛋白质互作的较理想系统。
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