公开(公告)号：CN101921797A

公开(公告)日：2010-12-22

申请号：CN201010199334.8

申请日：2010-06-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 曹斌云 ,  安小鹏 ,  杨莎 ,  王韵斐 ,  侯金星 ,  陈秋菊 ,  崔易虹 ,  王建刚 ,  宋宇轩

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/26 ,  C12N15/63 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/64

Abstract: 人白细胞介素-2基因整合表达载体的构建，以人静脉血为试验材料，提取总RNA，反转录成cDNA，针对人白介素2基因的编码区，设计一对含酶切位点的特异性引物，分别引入白介素-2基因的编码区的ApaI酶切位点和SalI酶切位点，PCR扩增并克隆到pMDTM19-TVector载体中；以pBC1质粒为模板，扩增β-酪蛋白5′同源短臂和β-酪蛋白3′同源长臂，以pIRES质粒为模板，扩增新霉素抗性筛选标记基因序列；以pBluskm为载体骨架，分别与5′同源短臂、3′同源长臂和新霉素抗性筛选标记基因序列相连，构建重组载体5′-3′-E-neor，双酶切含IL-2基因的pMDTM19-T Vector载体，凝胶回收目的片段并与5′-3′-E-neor相连，构建IL-2基因整合表达载体；利用脂质体将构建的IL-2基因整合表达载体转染胎儿成纤维细胞，定位在β-酪蛋白基因序列中。