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公开(公告)号：CN111235309B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202010064413.1
申请日：2020-01-20
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种快速测定囊泡病毒滴度的绝对定量PCR方法，是将含囊泡病毒的待测样品超声破碎，然后稀释、过滤，用其感染对数生长期细胞1h，收集细胞悬液、计算细胞数量，提取总DNA；对上述DNA进行qPCR检测，以含有该片段的pGEM‑T载体为标准品，绘制绝对定量PCR检测的标准曲线。根据样品的Ct值计算出每样品中含有的病毒基因组拷贝数。根据感染复数公式，计算感染每个细胞的平均病毒粒子数量，即感染时病毒与细胞数量的比值计算病毒滴度。本方法测定囊泡病毒滴度，当样品浓度为1×102～1×1011病毒基因拷贝/mL时检测时间仅需4‑6h，耗时短，与传统的病毒滴度检测方法相比，操作简单快捷，准确，极大提高了囊泡病毒滴度的检测效率，特别适用于囊泡病毒滴度的快速测定。
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公开(公告)号：CN104087614A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410314721.X
申请日：2014-07-03
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种降低棉铃虫单包埋衣壳核型多角体病毒G4毒株突变率病毒的构建方法，该方法是以fp25k基因未发生突变的野生型HaSNPV G4毒株的病毒粒子为实验材料；通过构建含fp25k基因的质粒，进行两次定点沉默突变；再通过构建含荧光蛋白的质粒，进行共转染、荧光筛选和空斑纯化后得到突变后的G4病毒。本方法得到的病毒消除了野生型病毒传代时导致高突变率产生的遗传因子，稳定性强。
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公开(公告)号：CN117568188A
公开(公告)日：2024-02-20
申请号：CN202311548510.8
申请日：2023-11-20
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明涉及微生物发酵技术和生物防治领域，公开了一种提高爪哇虫草菌产孢量的液固双相培养方法。所述培养方法包括步骤：（1）采用正交最优组合的液体培养基发酵配方，培养72h得到液体发酵产物；（2）将液体发酵产物接入固体培养基（由液体培养基和固体发酵基质构成）进行固体发酵，固体发酵基质配方为棉籽和小麦胚芽。本发明采用液固双相发酵，对碳源、氮源、无机盐、pH等条件的优化，大大提高了产孢量，且在固体发酵中，生产原料价格低廉，显著提高了产孢量。实验表明，发酵7 d后产孢量可达5.37±0.21×109孢子/g。
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公开(公告)号：CN101787394B
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN200910246161.8
申请日：2009-11-27
Applicant: 湖南农业大学 , 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局
IPC: C12Q1/68
Abstract: 一种进境植物检疫性有害生物蔗扁蛾的快速鉴定方法，以蔗扁蛾特异性引物CF720/CR1113对待测样品基因组DNA提取液进行PCR扩增，取PCR扩增液于0.5×TBE电泳缓冲液中在5V/cm电压下电泳后，置于溴化乙锭染色盒中染色，在紫外凝胶成像仪上观察扩增条带，判断该待测样品是否为检疫性有害生物蔗扁蛾；该方法的鉴定时间由原来的一周以上缩至一天以内，鉴定准确性由原来的70％提高至99％，可帮助出入境检疫部门、海关等相关单位在口岸进行快速、准确、高效的检测鉴定。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119913207A
公开(公告)日：2025-05-02
申请号：CN202510063165.1
申请日：2025-01-15
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种囊泡病毒穿梭载体的人工合成方法及其应用。囊泡病毒穿梭载体以烟芽夜蛾囊泡病毒全基因组为基础，分段PCR扩增得到AC1至AC13共13个基因片段。将基因片段分为四组转化至酵母原生质球中利用转化相关重组克隆(transformation‑associated recombination,TAR)技术获得AC‑1‑pGF‑TAR至AC‑4‑pGF‑TAR共4个大片段基因片段。本发明以烟芽夜蛾囊泡病毒全基因组为基础人工合成囊泡病毒穿梭载体，可以作为昆虫囊泡病毒的分子操作平台，获得一种快速、高效昆虫囊泡病毒编辑系统，在理论研究和生产应用方面都有着重要的作用。
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公开(公告)号：CN115948251A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202211554295.8
申请日：2022-12-06
Applicant: 湖南农业大学 , 华中农业大学 , 广东省农业科学院环境园艺研究所
Abstract: 一株野生型爪哇虫草菌生防菌株CJ01，从罹病死亡的烟粉虱虫体上分离得到，分类命名为爪哇虫草菌(Cordyceps javanica)CJ01，保藏编号为CCTCC NO：M20221721。本菌株CJ01对烟粉虱、蚜虫和蓟马等重大农业害虫具有高效、特异和稳定的杀虫活性，且制备成本低、环境污染小，有望研发为微生物杀虫剂，用于防治烟粉虱、蚜虫和蓟马等重大农业害虫引起的虫害，满足我国对害虫绿色可持续综合防控的重要需求。
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公开(公告)号：CN106048090A
公开(公告)日：2016-10-26
申请号：CN201610522012.X
申请日：2016-07-05
CPC classification number: C12Q1/06
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体而言，公开了一种用于囊泡病毒滴度的快速检测方法。该方法重悬对数生长期Sf9昆虫细胞；置培养箱中静置培养30分钟至细胞贴壁，弃上清培养基，换用新的Sf‑900IISFM培养基；利用血小球计数板测定细胞浓度；取Sf9昆虫细胞悬液与囊泡病毒稀释液混匀后接种至96孔细胞培养盘；置于培养箱中培养24小时后，每孔加台盼蓝染色液，统计每孔被染色细胞个数、总细胞个数。计算每孔Sf9昆虫细胞死亡率，每孔的死细胞率低于对照组的死细胞率，认定该孔被囊泡病毒侵染，反之则认为该孔未被病毒侵染，根据公式计算囊泡病毒的TCID50。本发明测定囊泡病毒滴度的方法结合了细胞染色，可用于囊泡病毒滴度的快速测定，测定结果更为准确。
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公开(公告)号：CN103734095B
公开(公告)日：2015-07-08
申请号：CN201410022346.1
申请日：2014-01-17
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01K67/033
Abstract: 一种单寄生茧蜂的室内人工繁殖方法，该方法包括寄主养殖和育蜂步骤，其中，寄主养殖是以二至三龄斜纹夜蛾幼虫为繁殖寄主，并将部分幼虫转移到6℃环境中饲养至老龄幼虫以化蛹，形成寄主幼虫的世代重叠；育蜂包括蜂的接种、茧的管理及成蜂的管理等，蜂的接种是在2×10cm的平底试管放入有被寄主幼虫啃食痕迹的叶片和5头健康的二至三龄斜纹夜蛾幼虫，接蜂时间为2小时；茧及成蜂的管理需要在相对适宜的条件下进行，并配合相应管理技术。本方法材料易于取得，繁殖率高，稳定性强。
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公开(公告)号：CN104041462A
公开(公告)日：2014-09-17
申请号：CN201410314662.6
申请日：2014-07-03
Applicant: 湖南农业大学
IPC: A01K67/033
Abstract: 一种调控斯氏侧沟茧蜂滞育的方法，该方法包括滞育诱导、滞育储存和滞育解除三个步骤。滞育诱导是将被斯氏测沟茧蜂寄生1d-3d的斜纹夜蛾幼虫单独分装于平底试管中，置于温度18±1℃、相对湿度70±10％、光周期L10:D14的条件下进行诱导，待寄主幼虫出茧后即得到滞育状态的蜂茧；滞育储存是将寄主幼虫移除后，在滞育茧上铺潮湿细沙，转移至6℃黑暗贮存；滞育解除是将滞育茧置于27±2℃、湿度70±10％、光周期L14:D10条件下，经历5d左右得到羽化的斯氏侧沟茧蜂。由该方法引导的斯氏测沟茧蜂滞育率可达98％以上，以滞育茧于6℃条件下保存3-5个月，羽化后的蜂在产卵量、寿命等生物学指标发面未出现退化。本方法能有效延长蜂种保存周期4-5倍，为斯氏测沟茧蜂发育的调控提供了参考依据。
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