公开(公告)号：CN104087614A

公开(公告)日：2014-10-08

申请号：CN201410314721.X

申请日：2014-07-03

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 黄国华 ,  李顺姬 ,  成小文 ,  胡珏 ,  刘双清

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/01 ,  C12R1/93

Abstract: 一种降低棉铃虫单包埋衣壳核型多角体病毒G4毒株突变率病毒的构建方法，该方法是以fp25k基因未发生突变的野生型HaSNPV G4毒株的病毒粒子为实验材料；通过构建含fp25k基因的质粒，进行两次定点沉默突变；再通过构建含荧光蛋白的质粒，进行共转染、荧光筛选和空斑纯化后得到突变后的G4病毒。本方法得到的病毒消除了野生型病毒传代时导致高突变率产生的遗传因子，稳定性强。

公开(公告)号：CN103484492A

公开(公告)日：2014-01-01

申请号：CN201310460159.7

申请日：2013-09-30

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 黄国华 ,  李顺姬 ,  刘双清 ,  王星 ,  成小文

IPC: C12N15/66

Abstract: 一种将多个DNA片段同时连接至同一载体上的方法，是依托Glass milk的DNA胶回收方法，将几个待连接的DNA片段PCR产物以及载体片段从凝胶上一同洗脱并回收，然后加入DNA连接酶与连接缓冲液，4℃连接过夜，将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖。本方法的连接过程无需考虑DNA片段浓度匹配问题，操作简单，周期短，价格低廉。

公开(公告)号：CN103734095B

公开(公告)日：2015-07-08

申请号：CN201410022346.1

申请日：2014-01-17

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 黄国华 ,  李顺姬 ,  刘双清 ,  易文婷 ,  黄菊平 ,  全思源 ,  常阳阳

IPC: A01K67/033

Abstract: 一种单寄生茧蜂的室内人工繁殖方法，该方法包括寄主养殖和育蜂步骤，其中，寄主养殖是以二至三龄斜纹夜蛾幼虫为繁殖寄主，并将部分幼虫转移到6℃环境中饲养至老龄幼虫以化蛹，形成寄主幼虫的世代重叠；育蜂包括蜂的接种、茧的管理及成蜂的管理等，蜂的接种是在2×10cm的平底试管放入有被寄主幼虫啃食痕迹的叶片和5头健康的二至三龄斜纹夜蛾幼虫，接蜂时间为2小时；茧及成蜂的管理需要在相对适宜的条件下进行，并配合相应管理技术。本方法材料易于取得，繁殖率高，稳定性强。

公开(公告)号：CN104041462A

公开(公告)日：2014-09-17

申请号：CN201410314662.6

申请日：2014-07-03

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 黄国华 ,  张云宣 ,  徐芝 ,  陈旭阳 ,  李顺姬 ,  刘双清

IPC: A01K67/033

Abstract: 一种调控斯氏侧沟茧蜂滞育的方法，该方法包括滞育诱导、滞育储存和滞育解除三个步骤。滞育诱导是将被斯氏测沟茧蜂寄生1d-3d的斜纹夜蛾幼虫单独分装于平底试管中，置于温度18±1℃、相对湿度70±10％、光周期L10:D14的条件下进行诱导，待寄主幼虫出茧后即得到滞育状态的蜂茧；滞育储存是将寄主幼虫移除后，在滞育茧上铺潮湿细沙，转移至6℃黑暗贮存；滞育解除是将滞育茧置于27±2℃、湿度70±10％、光周期L14:D10条件下，经历5d左右得到羽化的斯氏侧沟茧蜂。由该方法引导的斯氏测沟茧蜂滞育率可达98％以上，以滞育茧于6℃条件下保存3-5个月，羽化后的蜂在产卵量、寿命等生物学指标发面未出现退化。本方法能有效延长蜂种保存周期4-5倍，为斯氏测沟茧蜂发育的调控提供了参考依据。

公开(公告)号：CN103734095A

公开(公告)日：2014-04-23

申请号：CN201410022346.1

申请日：2014-01-17

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 黄国华 ,  李顺姬 ,  刘双清 ,  易文婷 ,  黄菊平 ,  全思源 ,  常阳阳

IPC: A01K67/033

Abstract: 一种单寄生茧蜂的室内人工繁殖方法，该方法包括寄主养殖和育蜂步骤，其中，寄主养殖是以二至三龄斜纹夜蛾幼虫为繁殖寄主，并将部分幼虫转移到6℃环境中饲养至老龄幼虫以化蛹，形成寄主幼虫的世代重叠；育蜂包括蜂的接种、茧的管理及成蜂的管理等，蜂的接种是在2×10cm的平底试管放入有被寄主幼虫啃食痕迹的叶片和5头健康的二至三龄斜纹夜蛾幼虫，接蜂时间为2小时；茧及成蜂的管理需要在相对适宜的条件下进行，并配合相应管理技术。本方法材料易于取得，繁殖率高，稳定性强。