公开(公告)号：CN111235309B

公开(公告)日：2022-09-30

申请号：CN202010064413.1

申请日：2020-01-20

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 黄国华 ,  宋晓慧 ,  李梓琦 ,  黎妮

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686

Abstract: 一种快速测定囊泡病毒滴度的绝对定量PCR方法，是将含囊泡病毒的待测样品超声破碎，然后稀释、过滤，用其感染对数生长期细胞1h，收集细胞悬液、计算细胞数量，提取总DNA；对上述DNA进行qPCR检测，以含有该片段的pGEM‑T载体为标准品，绘制绝对定量PCR检测的标准曲线。根据样品的Ct值计算出每样品中含有的病毒基因组拷贝数。根据感染复数公式，计算感染每个细胞的平均病毒粒子数量，即感染时病毒与细胞数量的比值计算病毒滴度。本方法测定囊泡病毒滴度，当样品浓度为1×102～1×1011病毒基因拷贝/mL时检测时间仅需4‑6h，耗时短，与传统的病毒滴度检测方法相比，操作简单快捷，准确，极大提高了囊泡病毒滴度的检测效率，特别适用于囊泡病毒滴度的快速测定。

公开(公告)号：CN111235309A

公开(公告)日：2020-06-05

申请号：CN202010064413.1

申请日：2020-01-20

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 黄国华 ,  宋晓慧 ,  李梓琦 ,  黎妮

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686

Abstract: 一种快速测定囊泡病毒滴度的绝对定量PCR方法，是将含囊泡病毒的待测样品超声破碎，然后稀释、过滤，用其感染对数生长期细胞1h，收集细胞悬液、计算细胞数量，提取总DNA；对上述DNA进行qPCR检测，以含有该片段的pGEM-T载体为标准品，绘制绝对定量PCR检测的标准曲线。根据样品的Ct值计算出每样品中含有的病毒基因组拷贝数。根据感染复数公式，计算感染每个细胞的平均病毒粒子数量，即感染时病毒与细胞数量的比值计算病毒滴度。本方法测定囊泡病毒滴度，当样品浓度为1×102～1×1011病毒基因拷贝/mL时检测时间仅需4-6h，耗时短，与传统的病毒滴度检测方法相比，操作简单快捷，准确，极大提高了囊泡病毒滴度的检测效率，特别适用于囊泡病毒滴度的快速测定。