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公开(公告)号：CN119193447A
公开(公告)日：2024-12-27
申请号：CN202411401080.1
申请日：2024-10-09
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种无营养缺陷生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的基因工程菌及其构建方法和应用。一种无营养缺陷O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的基因工程菌，在底盘菌株Escherichia coli W3110中敲除苏氨酸外排蛋白编码基因rhtC，敲除苏氨酸脱氢酶编码基因tdcB，敲除苏氨酸3‑脱氢酶编码基因tdh，回补由苏氨酸浓度动态调控的高丝氨酸激酶编码基因thrB，即得所述无营养缺陷O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的基因工程菌。该重组大肠杆菌为无营养缺陷型菌株，不需要额外添加氨基酸，极大地降低了成本和提升了产量，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN118931936A
公开(公告)日：2024-11-12
申请号：CN202411039223.9
申请日：2024-07-31
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种高产赤霉素GA3的藤仓赤霉菌基因工程菌、构建方法及应用。本发明采用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，敲除出发菌株藤仓赤霉菌Fusariumfujikuroi基因组上比卡维林合成基因簇关键基因bik3，并在该位点异源表达来源于解脂耶氏酵母的截断甲羟戊二酸单酰辅酶A还原酶基因tHMGR，进一步分别在bik1和bik2基因位点连续整合多拷贝tHMGR。该基因工程菌在生产赤霉素GA3过程中提高了前体IPP和DMAPP的供应力，经过168h发酵培养基发酵后GA3产量达2.54g/L，相较于出发菌株GA3产量提高40.33％。
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公开(公告)号：CN118638841A
公开(公告)日：2024-09-13
申请号：CN202410907882.3
申请日：2024-07-08
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种高产棘白菌素B基因工程菌的构建方法，并将构建得到基因工程菌应用于微生物发酵制备棘白菌素B中。本发明通过连续过表达构巢曲霉全局调控因子laeA基因和天鹅绒家族调控因子veA、velB基因，增强棘白菌素B合成代谢路径中相关基因的转录水平，提高了棘白菌素B的积累。本发明提供的高产棘白菌素B的重组构巢曲霉，经过改造后的重组构巢曲霉相比于野生型增强了ECB基因簇整体转录水平，提高了代谢过程的合成能力。经改造后性能最优的菌株在发酵产棘白菌素B的水平相比于出发菌株从2150mg/L提高到2795mg/L，显著提升棘白菌素B生产能力，可应用于大规模棘白菌素B生产中。
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公开(公告)号：CN117402803A
公开(公告)日：2024-01-16
申请号：CN202311363366.0
申请日：2023-10-20
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及基因过程技术领域，公开了一种高产D‑泛酸的枯草芽孢杆菌基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过“来源于pP43NMK的P43启动子和RBS序列置换alsS基因的原有启动子，强化丙酮酸转化为乙酰乳酸；敲除ilvA基因，降低异亮氨酸浓度以增加泛解酸支路通量；同时敲除乳酸途径的基因lctE、mgsA、ywbC基因，敲除乙酰乙酸途径yxjF基因，从而减少乳酸的积累，促进细胞的生长；并敲除乙偶姻途径中的alsD、bdhA基因，削弱副产物的合成”，使得D‑泛酸产量增加，基于此，构建得到一种高产D‑泛酸的枯草芽孢杆菌基因工程菌。
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公开(公告)号：CN117384814A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311391273.9
申请日：2023-10-24
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产D‑泛酸的无质粒基因工程菌及其构建方法与应用。为了解决现有技术中生物发酵法生产D‑泛酸发酵过程不稳定、产量不高的技术问题，本发明以大肠杆菌为底盘菌，通过代谢工程技术，改造其代谢途径中的关键基因，过表达来源于Corynebacterium glutamicum的panB、panC基因和来源于Escherichia coli的panE、atpFH基因，敲除ptsG、ppsA、ydiF、tdcDE、ltaEpoxB、mgsA、adhE、aroG、ygaZH、lacI、arcA基因，并异源表达来源于Bacillus subtilis的pckA基因、来源于Vitreoscilla的VHB基因，最终得到一种高产D‑泛酸的无质粒基因工程菌。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117004541A
公开(公告)日：2023-11-07
申请号：CN202310829179.0
申请日：2023-07-07
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法与应用，通过敲除控制菌株胁迫应激响应途径的压力响应调节因子(rssB)、阻遏碳储存调控因子(csrB)以及过表达细胞碳储存调控因子(csrA)；过表达影响电子传递链途径的σS(或σ38)因子(rpoS)和低氧诱导因子(arcA)的基因降低菌株体内活性氧(ROS)的含量；过表达RNA分子伴侣(hfQ)促进并调节RNA(sRNA)和mRNA之间的相互作用以及RNA的稳定性，有效的提升菌株的CellGrowth(OD600)，DPA产量从底盘菌株的3.83g/L提升至4.35g/L，D‑泛酸产量提升了13.58％，具有很大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN114517161A
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN202210232658.X
申请日：2022-03-10
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种高产赤霉素GA3的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过增强表达藤仓赤霉菌中表达氮源调控因子AreA的基因和全局调控因子Lae1的基因，增强其对赤霉素合成代谢路径中相关基因的正向调控作用，提高了相关基因的转录水平，提高了赤霉素GA3的积累。本发明提供的高产赤霉素GA3的重组藤仓赤霉菌，经过改造后的重组藤仓赤霉菌相比于野生型增强了GA基因簇整体转录水平，提高了代谢过程的合成能力，削弱了GA3合成相关基因的转录抑制，能够更好的利用碳源物质、氮源物质进行赤霉素GA3的生产，经过改造后性能最优的菌株在发酵产赤霉素GA3的水平相比于出发菌株从2 g/L提高到3.25 g/L，显著提升赤霉素GA3生产能力，可应用于大规模赤霉素GA3生产中。
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公开(公告)号：CN113832089A
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN202111060491.5
申请日：2021-09-10
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种消除副产物AmA且高产两性霉素B的重组结节链霉菌，由如下方法构建获得：以结节链霉菌CCTCC NO：M 2017426为底盘菌，突变其聚酮合酶ER5结构域关键氨基酸位点，再导入SEQ ID NO.1～5所示基因的串联基因获得。本发明有益效果主要体现在：(1)本发明获得的突变菌株具有完全不产副产物AmA的特性，便于工业化生产分离纯化，同时AmB产量进一步提高；(2)过表达中心碳代谢及脂肪酸代谢途径关键基因，加强菌株对碳源的摄取，提高碳源转化率，进一步提高了AmB产量。
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公开(公告)号：CN119391742A
公开(公告)日：2025-02-07
申请号：CN202411600203.4
申请日：2024-11-11
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种生产赤霉素GA4+7的基因工程菌及其构建方法和应用。所述基因工程菌采用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，在底盘菌藤仓赤霉菌Fusariumfujikuroi基因组中P450‑3基因位点插入截断的甲羟戊二酸单酰辅酶A还原酶编码基因tHMGR，并进一步在fsr1、fsr3、fsr4位点分别插入POT1、FOX1、FAA1基因来实现β氧化途径的强化。该基因工程菌在生产赤霉素GA4+7过程中提高了前体乙酰CoA的供应力，经过168h发酵培养基发酵后GA4+7产量达2.66g/L，相较于出发菌株GA4+7产量提高443.33％。
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公开(公告)号：CN119286805A
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202411694283.4
申请日：2024-11-25
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及酶工程技术领域，公开了一种泛酸合成酶突变体及其应用。本发明通过对来源于大肠杆菌的泛酸合成酶的第62位、第123位、第189位氨基酸进行定点突变，通过活性口袋附近丙氨酸扫描策略，定点定向突变改变蛋白质氨基酸残基，将第62位笨丙氨酸突变为异亮氨酸和/或第123位氨基酸精氨酸突变为谷氨酰胺和/或第189位精氨酸变为异亮氨酸，提高泛酸合成酶催化D‑泛醇的效率，提高D‑泛醇的产量。最终，当上述位点同时突变时，泛酸合成酶的重组大肠杆菌可将泛酸合成酶催化D‑泛醇合成的效率提升1.32倍，携带了所构建的泛酸合成酶突变体的基因工程菌株在摇瓶发酵泛醇中产量提升3.65倍。
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