公开(公告)号：CN117402803A

公开(公告)日：2024-01-16

申请号：CN202311363366.0

申请日：2023-10-20

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  谢琳 ,  周俊平 ,  陈振杰 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/75 ,  C12P13/04 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及基因过程技术领域，公开了一种高产D‑泛酸的枯草芽孢杆菌基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过“来源于pP43NMK的P43启动子和RBS序列置换alsS基因的原有启动子，强化丙酮酸转化为乙酰乳酸；敲除ilvA基因，降低异亮氨酸浓度以增加泛解酸支路通量；同时敲除乳酸途径的基因lctE、mgsA、ywbC基因，敲除乙酰乙酸途径yxjF基因，从而减少乳酸的积累，促进细胞的生长；并敲除乙偶姻途径中的alsD、bdhA基因，削弱副产物的合成”，使得D‑泛酸产量增加，基于此，构建得到一种高产D‑泛酸的枯草芽孢杆菌基因工程菌。

公开(公告)号：CN117384814A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202311391273.9

申请日：2023-10-24

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  方雪莲 ,  周俊平 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/52 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产D‑泛酸的无质粒基因工程菌及其构建方法与应用。为了解决现有技术中生物发酵法生产D‑泛酸发酵过程不稳定、产量不高的技术问题，本发明以大肠杆菌为底盘菌，通过代谢工程技术，改造其代谢途径中的关键基因，过表达来源于Corynebacterium glutamicum的panB、panC基因和来源于Escherichia coli的panE、atpFH基因，敲除ptsG、ppsA、ydiF、tdcDE、ltaEpoxB、mgsA、adhE、aroG、ygaZH、lacI、arcA基因，并异源表达来源于Bacillus subtilis的pckA基因、来源于Vitreoscilla的VHB基因，最终得到一种高产D‑泛酸的无质粒基因工程菌。

公开(公告)号：CN117004541A

公开(公告)日：2023-11-07

申请号：CN202310829179.0

申请日：2023-07-07

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  随兰多 ,  黄良刚 ,  姚远 ,  周俊平 ,  张博 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法与应用，通过敲除控制菌株胁迫应激响应途径的压力响应调节因子(rssB)、阻遏碳储存调控因子(csrB)以及过表达细胞碳储存调控因子(csrA)；过表达影响电子传递链途径的σS(或σ38)因子(rpoS)和低氧诱导因子(arcA)的基因降低菌株体内活性氧(ROS)的含量；过表达RNA分子伴侣(hfQ)促进并调节RNA(sRNA)和mRNA之间的相互作用以及RNA的稳定性，有效的提升菌株的CellGrowth(OD600)，DPA产量从底盘菌株的3.83g/L提升至4.35g/L，D‑泛酸产量提升了13.58％，具有很大的应用潜力。

公开(公告)号：CN113832089A

公开(公告)日：2021-12-24

申请号：CN202111060491.5

申请日：2021-09-10

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 张博 ,  柳志强 ,  黄良刚 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N15/61 ,  C12N15/113 ,  C12N15/76 ,  C12P19/26 ,  C12R1/465

Abstract: 本发明涉及一种消除副产物AmA且高产两性霉素B的重组结节链霉菌，由如下方法构建获得：以结节链霉菌CCTCC NO：M 2017426为底盘菌，突变其聚酮合酶ER5结构域关键氨基酸位点，再导入SEQ ID NO.1～5所示基因的串联基因获得。本发明有益效果主要体现在：(1)本发明获得的突变菌株具有完全不产副产物AmA的特性，便于工业化生产分离纯化，同时AmB产量进一步提高；(2)过表达中心碳代谢及脂肪酸代谢途径关键基因，加强菌株对碳源的摄取，提高碳源转化率，进一步提高了AmB产量。

公开(公告)号：CN119859602A

公开(公告)日：2025-04-22

申请号：CN202510109454.0

申请日：2025-01-23

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  郑慧慧 ,  周俊平 ,  王怡濛 ,  欧阳水平 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N15/55 ,  C12N15/57 ,  C12N15/31 ,  C12P13/04 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种稳定高产D‑泛酸的工程菌及其构建方法与应用。本发明通过代谢工程技术，改造其代谢途径中的关键基因，具体地，通过增强ysaA基因的表达，修饰亚甲基四氢叶酸(MTF)生物合成途径提高MTF的水平可导致泛酸生物合成途径关键中间体酮泛解酸水平的提高，从而提高D‑泛酸的产量。同时，将基因组中产芽孢的spoIVB或/和spoIIIE基因敲除，减少芽孢形成的能量消耗和物质浪费，促进次生代谢产物的生成，进而增加D‑泛酸的合成；另外，敲除基因组中prophage1(alkA‑ybdO)、prophage3(ydiM‑ydjJ)、prophage6(yobB‑yobO)区域，减少基因组的冗余，提高菌株的代谢效率和稳定性，进而有效增加D‑泛酸的合成。

公开(公告)号：CN119286805A

公开(公告)日：2025-01-10

申请号：CN202411694283.4

申请日：2024-11-25

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  周俊平 ,  张政 ,  辛歆媛 ,  黄良刚 ,  逄爱萍 ,  郑裕国

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及酶工程技术领域，公开了一种泛酸合成酶突变体及其应用。本发明通过对来源于大肠杆菌的泛酸合成酶的第62位、第123位、第189位氨基酸进行定点突变，通过活性口袋附近丙氨酸扫描策略，定点定向突变改变蛋白质氨基酸残基，将第62位笨丙氨酸突变为异亮氨酸和/或第123位氨基酸精氨酸突变为谷氨酰胺和/或第189位精氨酸变为异亮氨酸，提高泛酸合成酶催化D‑泛醇的效率，提高D‑泛醇的产量。最终，当上述位点同时突变时，泛酸合成酶的重组大肠杆菌可将泛酸合成酶催化D‑泛醇合成的效率提升1.32倍，携带了所构建的泛酸合成酶突变体的基因工程菌株在摇瓶发酵泛醇中产量提升3.65倍。

公开(公告)号：CN117511841A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311568389.5

申请日：2023-11-22

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  逄爱萍 ,  王云 ,  张博 ,  黄良刚 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/78 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12P19/44 ,  C12R1/40

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产鼠李糖脂的基因工程菌、构建方法及应用。本发明提供的提高鼠李糖脂产量的基因工程菌rhlAB‑ΔalgD，通过在恶臭假单胞菌KT2440基因组中敲除algD基因使更多的葡萄糖‑6‑磷酸被重新分配到dDTP‑L‑鼠李糖的支路上，从而使鼠李糖脂的产量提高了16.8％；本发明提供的提高鼠李糖脂产量的基因工程菌rhlAB‑Δflag，通过在恶臭假单胞菌KT2440基因组中敲除flag基因簇使菌株的能量(ATP)和还原力(NADPH)过剩，从而使鼠李糖脂的产量提高了2倍；本发明提供的高产鼠李糖脂的基因工程菌rhlAB‑rmlBDAC‑Δflag，在突变株rhlAB‑Δflag的基础上异源过表达来自铜绿假单胞菌PAO1的rmlBDAC基因簇来增加dDTP‑L‑鼠李糖的供应，使得恶臭假单胞菌KT2440中的鼠李糖脂产量进一步提高。

公开(公告)号：CN117264862A

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202311378915.1

申请日：2023-10-24

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  陈振杰 ,  周俊平 ,  谢琳 ,  张博 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N15/52 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明以枯草芽孢杆菌为底盘菌，改造其代谢途径，一是异源表达来源于大肠杆菌的ppC、aspC基因，然后过表达β‑丙氨酸合成途径中的panD、panC、aspB基因，强化泛酸合成前体β‑丙氨酸的合成；二是敲除nadB基因，减少β‑丙氨酸前体L‑天冬氨酸合成途径中支路代谢流；三是异源表达大肠杆菌aspA基因，继续加强β‑丙氨酸的积累；四是敲除gabT基因，在减少竞争支路代谢流的基础上进一步弱化了支链有机酸合成途径代谢流；最后利用质粒异源表达来源于大肠杆菌的panD基因和来源于谷氨酸棒杆菌的panC基因，构建得到高产D‑泛酸的枯草芽孢杆菌基因工程菌株。

公开(公告)号：CN116496964A

公开(公告)日：2023-07-28

申请号：CN202310259739.3

申请日：2023-03-17

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  许诺然 ,  黄良刚 ,  张博 ,  周俊平 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌及其应用。本发明提供的高产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸的重组大肠杆菌由以下改造策略的组合获得：在大肠杆菌W3110中将编码高丝氨酸O‑乙酰基转移酶的metX基因整合至编码L‑精氨酸ABC转运体ATP结合亚基的artP基因位点，再依次敲除编码磷酸乙酰基转移酶的patZ基因、编码转录反终止子和mRNA稳定性调节子的cspC基因，随后将编码ATP‑NAD激酶的ppnK基因整合至编码NADPH依赖性醛还原酶的yahK基因位点，最后将编码乙酰辅酶A合成酶acs基因启动子替换为Ptrc启动子得到重组大肠杆菌。使用该重组大肠杆菌发酵生产O‑乙酰‑L‑高丝氨酸具有产量高的优势。

公开(公告)号：CN116463272A

公开(公告)日：2023-07-21

申请号：CN202310185193.1

申请日：2023-02-22

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  杨桧 ,  逄爱萍 ,  张博 ,  周俊平 ,  黄良刚 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12N15/31 ,  C12P13/02 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明提供的高产D‑泛酸的基因工程菌，通过在谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032中敲除ilvA基因以减少消耗丙酮酸生成异亮氨酸，同时过表达泛酸合成途径中3‑甲基‑2‑氧桥丁酸羟甲基转移酶基因panB和泛酸合成酶基因panC并异源过表达来自大肠杆菌的泛酸还原酶panE使得谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032中的D‑泛酸产量进一步提高。