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公开(公告)号：CN105969802B
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201610290881.4
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种家蚕后部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用。获得包含丝素轻链基因启动子、18s rRNA基因启动子、His 6序列、DDDDK、丝素轻链蛋白信号肽基因、丝素轻链基因polyA、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40的3’序列，然后再构建质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40的3’序列，第二表达框包括丝素轻链基因启动子、18s rRNA基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链基因polyA，且含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建转基因家蚕donor质粒的构建工作量，提高了家蚕生物反应器工作效率，提高了外源蛋白的表达量。
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公开(公告)号：CN104651409B
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201510085682.5
申请日：2015-02-17
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种类转录激活子效应蛋白介导的高效转基因方法。采用分子生物学技术构建包含类转录激活子效应蛋白DNA序列和piggyBac转座酶DNA序列的辅助质粒，在体外转录成mRNA；采用显微注射法将该辅助质粒的mRNA与含有外源基因的piggyBac转座子质粒的DNA一起导入到动物的受精卵中，获得外源基因能够稳定遗传和表达的转基因动物；根据标志基因或基因的表达特征筛选出转基因阳性个体；本发明方法可以使piggyBac转座子在TALE‑PBase融合蛋白的作用下高效的插入宿主生物的基因组中，可显著地提高piggyBac转座子介导的转基因效率，为获得转基因动物以及插入诱变等研究提供帮助。
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公开(公告)号：CN105950653A
公开(公告)日：2016-09-21
申请号：CN201610287168.4
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江大学
CPC classification number: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/66 , C12N2800/105 , C12N2800/90
Abstract: 本发明公开了一种家蚕中部丝腺生物反应器通用型质粒及其构建方法和应用。获得丝胶蛋白1基因启动子、His 6序列、DDDDK序列、丝素轻链蛋白信号肽、丝素轻链蛋白基因3’末端序列、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40序列，然后再构建质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40序列，第二表达框包括丝胶蛋白1基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链蛋白基因3’末端序列，且含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建donor质粒的工作量，提高了家蚕中部生物反应器工作效率。
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公开(公告)号：CN105907786A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610296590.6
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种用于表达T4连接酶的家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其应用与方法。质粒以piggyBac转座子为基础并带有Amp抗性基因，包含有作为外源基因的T4连接酶基因和作为标记基因的绿色荧光EGFP基因的功能表达框，质粒用分子生物学方法构建，且DDDDK与丝素轻链基因polyA之间含有ApaI和NheI专一性的两个酶切位点，采用ApaI和NheI双酶切通用型质粒，与T4连接酶基因连接后，与辅助质粒共同注射到家蚕受精卵内，利用转座子特性使绿色荧光蛋白基因和T4连接酶基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，获得转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕丝腺细胞特异地合成分泌T4连接酶蛋白。
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公开(公告)号：CN105907784A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610292120.2
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种用于表达T4连接酶的家蚕后部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其应用与方法。质粒以piggyBac转座子为基础并带有Amp抗性基因，包含有作为外源基因的T4连接酶基因和作为标记基因的绿色荧光EGFP基因的功能表达框，质粒用分子生物学方法构建，且DDDDK与丝素轻链基因polyA之间含有ApaI和NheI专一性的两个酶切位点，采用ApaI和NheI双酶切通用型质粒，与T4连接酶基因连接后，与辅助质粒共同注射到家蚕受精卵内，利用转座子特性使绿色荧光蛋白基因和T4连接酶基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，获得转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕丝腺细胞特异地合成分泌T4连接酶蛋白。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104404072A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410678673.2
申请日：2014-11-24
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种用标记基因预测外源基因表达量及筛选转基因生物的方法。采用分子生物学技术构建包含有标记基因和外源基因两个相邻且转录方向相同的表达框的转基因表达质粒；采用显微注射法将转基因质粒与辅助质粒一起导入到生物的基因组内，培育成外源基因能够稳定遗传和表达的转基因生物；根据转基因生物中标记基因表达量的信息预测外源基因表达量，并筛选获得该外源基因表达量对应的生物个体或品种。本发明可简单、快捷、省力地从大量的转基因生物中筛选出高效表达外源基因的转基因生物个体或品种，为建立高效的生物反应器提供了理想的筛选手段。
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公开(公告)号：CN106399363A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610290166.0
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用。获得丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、His 6序列、DDDDK、丝素轻链蛋白信号肽、丝素轻链基因3’末端序列、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40的3’末端序列，然后再顺序连接构建成质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40序列，第二表达框包括丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列，且在DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列之间含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建donor质粒的工作量，提高了家蚕丝腺生物反应器工作效率，提高了外源蛋白的表达量。
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公开(公告)号：CN104651409A
公开(公告)日：2015-05-27
申请号：CN201510085682.5
申请日：2015-02-17
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种类转录激活子效应蛋白介导的高效转基因方法。采用分子生物学技术构建包含类转录激活子效应蛋白DNA序列和piggyBac转座酶DNA序列的辅助质粒，在体外转录成mRNA；采用显微注射法将该辅助质粒的mRNA与含有外源基因的piggyBac转座子质粒的DNA一起导入到动物的受精卵中，获得外源基因能够稳定遗传和表达的转基因动物；根据标志基因或基因的表达特征筛选出转基因阳性个体；本发明方法可以使piggyBac转座子在TALE-PBase融合蛋白的作用下高效的插入宿主生物的基因组中，可显著地提高piggyBac转座子介导的转基因效率，为获得转基因动物以及插入诱变等研究提供帮助。
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公开(公告)号：CN104404072B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201410678673.2
申请日：2014-11-24
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种用标记基因预测外源基因表达量及筛选转基因生物的方法。采用分子生物学技术构建包含有标记基因和外源基因两个相邻且转录方向相同的表达框的转基因表达质粒；采用显微注射法将转基因质粒与辅助质粒一起导入到生物的基因组内，培育成外源基因能够稳定遗传和表达的转基因生物；根据转基因生物中标记基因表达量的信息预测外源基因表达量，并筛选获得该外源基因表达量对应的生物个体或品种。本发明可简单、快捷、省力地从大量的转基因生物中筛选出高效表达外源基因的转基因生物个体或品种，为建立高效的生物反应器提供了理想的筛选手段。
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公开(公告)号：CN105969802A
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201610290881.4
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种家蚕后部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用。获得包含丝素轻链基因启动子、18s rRNA基因启动子、His 6序列、DDDDK、丝素轻链蛋白信号肽基因、丝素轻链基因polyA、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40的3’序列，然后再构建质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40的3’序列，第二表达框包括丝素轻链基因启动子、18s rRNA基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链基因polyA，且含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建转基因家蚕donor质粒的构建工作量，提高了家蚕生物反应器工作效率，提高了外源蛋白的表达量。
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