公开(公告)号：CN117106736B

公开(公告)日：2024-02-20

申请号：CN202311385914.X

申请日：2023-10-25

Applicant: 江西农业大学

Inventor： 叶昱 ,  顾俊 ,  曾川 ,  沈金燕 ,  王培霞 ,  唐玉新 ,  王妮 ,  白雨溦 ,  黄冬艳 ,  宋德平

IPC: C12N7/01 ,  C12N7/04 ,  C12N15/85 ,  C12N15/38 ,  A61K39/245 ,  A61P31/22 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了利用CBE构建三基因缺失PRV毒株的方法和应用，涉及生物技术领域，选择PRV病毒中gE、TK、gI三基因作为靶标位点，设计sgRNA序列，根据sgRNA上下游序列分别合成单链寡核苷酸，然后退火获得带粘性末端的双链DNA片段，将载体经限制性内切酶酶切后回收片段，再与带粘性末端的双链DNA片段连接，获得连接产物；将连接产物转化至感受态细胞中，涂板筛选培养，挑阳性菌扩大培养，对阳性菌液抽提质粒；将质粒转染，对通过转染获得的病毒进行蚀斑纯化，每一轮均通过PCR扩增与测序的方法进行验证；纯化得到单克隆毒株；本发明方法效率高，对病毒基因的改变小，不引起病毒基因组出现大的结构变异，成本低。

公开(公告)号：CN117106736A

公开(公告)日：2023-11-24

申请号：CN202311385914.X

申请日：2023-10-25

Applicant: 江西农业大学

Inventor： 叶昱 ,  顾俊 ,  曾川 ,  沈金燕 ,  王培霞 ,  唐玉新 ,  王妮 ,  白雨溦 ,  黄冬艳 ,  宋德平

IPC: C12N7/01 ,  C12N7/04 ,  C12N15/85 ,  C12N15/38 ,  A61K39/245 ,  A61P31/22 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了利用CBE构建三基因缺失PRV毒株的方法和应用，涉及生物技术领域，选择PRV病毒中gE、TK、gI三基因作为靶标位点，设计sgRNA序列，根据sgRNA上下游序列分别合成单链寡核苷酸，然后退火获得带粘性末端的双链DNA片段，将载体经限制性内切酶酶切后回收片段，再与带粘性末端的双链DNA片段连接，获得连接产物；将连接产物转化至感受态细胞中，涂板筛选培养，挑阳性菌扩大培养，对阳性菌液抽提质粒；将质粒转染，对通过转染获得的病毒进行蚀斑纯化，每一轮均通过PCR扩增与测序的方法进行验证；纯化得到单克隆毒株；本发明方法效率高，对病毒基因的改变小，不引起病毒基因组出现大的结构变异，成本低。