公开(公告)号：CN118291560A

公开(公告)日：2024-07-05

申请号：CN202410467373.3

申请日：2024-04-10

Applicant: 江苏德源药业股份有限公司 ,  江苏海洋大学

Inventor： 王建涛 ,  张坤晓 ,  杨汉跃 ,  谢宝柱 ,  闫显光 ,  李梦磊 ,  孙恒 ,  王思琦 ,  丁成会 ,  戴晓慧 ,  耿楠 ,  孙玉倩 ,  张文文 ,  季鸿宇

IPC: C12P13/00 ,  C12P41/00 ,  C12N15/70 ,  C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种沙库巴曲中间体(2R，4S)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑((叔丁氧羰基)氨基)‑2‑甲基戊酸乙酯的合成方法。包括以下步骤：以(R，E)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑((叔丁氧羰基)氨基)‑2‑甲基‑2‑戊烯酸乙酯为底物，加入烯醇还原酶、NADP辅酶、葡萄糖和葡萄糖脱氢酶；所述烯醇还原酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.16所示，所述沙库巴曲中间体为(2R，4S)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑((叔丁氧羰基)氨基)‑2‑甲基戊酸乙酯。本发明的方法利用烯醇还原酶，结合葡萄糖脱氢酶再生NADPH辅酶，合成沙库巴曲中间体，合成工艺路线简单、绿色环保、成本低廉、转化效率高、产率高，适用性更广。

公开(公告)号：CN118109528A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410467379.0

申请日：2024-04-10

Applicant: 江苏海洋大学 ,  江苏德源药业股份有限公司

Inventor： 张坤晓 ,  杨汉跃 ,  李梦磊 ,  王建涛 ,  谢宝柱 ,  闫显光 ,  王思琦 ,  戴晓慧 ,  丁成会 ,  耿楠 ,  孙恒 ,  孙玉倩 ,  张文文 ,  季鸿宇

IPC: C12P13/00 ,  C12P41/00 ,  C12N15/70 ,  C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生物催化合成沙库巴曲中间体(2R，4S)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑氨基‑2‑甲基戊酸的方法。包括以下步骤：以(R，E)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑氨基‑2‑甲基‑2‑戊烯酸为底物，加入烯醇还原酶、NADP辅酶、葡萄糖和葡萄糖脱氢酶；所述烯醇还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述沙库巴曲中间体为(2R，4S)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑氨基‑2‑甲基戊酸。本发明的方法利用烯醇还原酶，结合葡萄糖脱氢酶再生NADPH辅酶，合成沙库巴曲中间体，合成工艺路线简单、绿色环保、成本低廉、转化效率高、产率高，适用性更广。

公开(公告)号：CN118109529A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410467389.4

申请日：2024-04-10

Applicant: 江苏海洋大学 ,  江苏德源药业股份有限公司

Inventor： 张坤晓 ,  闫显光 ,  李梦磊 ,  杨汉跃 ,  谢宝柱 ,  王建涛 ,  王思琦 ,  戴晓慧 ,  丁成会 ,  耿楠 ,  孙恒 ,  孙玉倩 ,  张文文 ,  季鸿宇

IPC: C12P13/00 ,  C12P41/00 ,  C12N15/70 ,  C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生物催化合成沙库巴曲中间体(2R，4S)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑氨基‑2‑甲基戊酸乙酯的方法。包括以下步骤：以(R，E)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑氨基‑2‑甲基‑2‑戊烯酸乙酯为底物，加入烯醇还原酶、NADP辅酶、葡萄糖和葡萄糖脱氢酶；所述烯醇还原酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.6～9所示，所述沙库巴曲中间体为(2R，4S)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑氨基‑2‑甲基戊酸乙酯。本发明的方法利用烯醇还原酶，结合葡萄糖脱氢酶再生NADPH辅酶，合成沙库巴曲中间体，合成工艺路线简单、绿色环保、成本低廉、转化效率高、产率高，适用性更广。

公开(公告)号：CN118516422A

公开(公告)日：2024-08-20

申请号：CN202410427152.3

申请日：2024-04-10

Applicant: 江苏海洋大学 ,  江苏德源药业股份有限公司

Inventor： 张坤晓 ,  杨汉跃 ,  李梦磊 ,  王建涛 ,  谢宝柱 ,  闫显光 ,  史大华 ,  曹阳 ,  王思琦 ,  戴晓慧 ,  丁成会 ,  耿楠 ,  孙恒 ,  孙玉倩 ,  张文文 ,  季鸿宇

IPC: C12P13/00 ,  C12P41/00 ,  C12N15/70 ,  C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生物催化合成沙库巴曲中间体的方法。包括以下步骤：以(R，E)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑((叔丁氧羰基)氨基)‑2‑甲基‑2‑戊烯酸为底物，加入烯醇还原酶、NADP辅酶、葡萄糖和葡萄糖脱氢酶；所述烯醇还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述沙库巴曲中间体为(2R，4S)‑5‑([1,1'‑联苯]‑4‑基)‑4‑((叔丁氧羰基)氨基)‑2‑甲基戊酸。本发明的方法利用烯醇还原酶，结合葡萄糖脱氢酶再生NADPH辅酶，合成沙库巴曲中间体，合成工艺路线简单、绿色环保、成本低廉、转化效率高、产率高，适用性更广。

公开(公告)号：CN115094102A

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN202210605026.3

申请日：2022-05-31

Applicant: 江苏海洋大学 ,  连云港博凯莱特生物科技有限公司

Inventor： 张坤晓 ,  侯学雯 ,  叶佳琪 ,  卢瑶 ,  陆欣 ,  葛绍勇

IPC: C12P17/12 ,  C12N9/12 ,  C12N9/04 ,  C12N11/091 ,  C12N11/089 ,  C12N11/14 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种固定化酶制备磷酸吡哆醛的方法，主要包括游离酶的制备，酶的固定化及填装，磷酸吡哆醛的制备反应等步骤。本发明提供的固定化酶制备磷酸吡哆醛的方法，相较于纯化学方法制备磷酸吡哆醛，条件更为温和，操作方便，所消耗的时间较短；且固定化的酶可以重复利用，环保高效，成本低廉，具有良好的工业化应用价值。

公开(公告)号：CN114214295A

公开(公告)日：2022-03-22

申请号：CN202111413972.X

申请日：2021-11-25

Applicant: 江苏海洋大学

Inventor： 张坤晓 ,  侯学雯 ,  杨玉梅 ,  叶佳琪

IPC: C12N9/04 ,  C12P17/16

Abstract: 本发明涉及化合物合成技术领域，具体涉及一种羰基还原酶及合成(S)‑3‑(二甲氨基)‑1‑(2‑噻吩基)‑1‑丙醇的方法。本发明以以3‑二甲氨基‑1‑(‑噻吩基)‑1‑丙酮盐酸盐为原料在无机盐溶液环境中加入羰基还原酶、葡萄糖脱氢酶组合物、辅酶因子、供氢体，在25‑40℃、pH值为6.8‑7.2条件下反应得到目标产物(S)‑3‑(二甲氨基)‑1‑(2‑噻吩基)‑1‑丙醇；所述的羰基还原酶的核苷酸序列如SEDQ ID NO.1所示，所述葡萄糖脱氢酶的核苷酸序列如SEDQ ID NO.2所示。本发明的方法操作简单，条件温和，产率高，选择性好，耗时短，成本较低，适合产业化应用。

公开(公告)号：CN110643558A

公开(公告)日：2020-01-03

申请号：CN201910969528.2

申请日：2019-10-12

Applicant: 莫纳(连云港)生物科技有限公司 ,  江苏海洋大学

Inventor： 张坤晓 ,  许恒皓 ,  葛绍勇 ,  李伦 ,  韩挺翰

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明是一种用于表达限制性内切酶KasI的甲基化保护菌株的筛选方法，该方法从菌株Haemophilus haemolyticus的基因组中使用甲基转移酶M.HhaI基因的特异性引物获得了甲基转移酶M.HhaI的基因；再经构建甲基转移酶M.HhaI的重组表达菌株，筛选、构建限制性内切酶KasI的重组表达菌株，最后重组表达质粒pBAD-R.KasI转化感受态细胞进行筛选培养，获得限制酶KasI的重组表达菌株。本发明方法实现了限制酶KasI的高效重组表达；利用阿拉伯糖操纵子表达系统进行限制酶KasI的重组表达；抵抗限制酶KasI对宿主基因组DNA的酶切，筛选出的M.HhaI甲基化保护菌株同样可应用于其他具有类似识别位点的限制酶的重组表达。

公开(公告)号：CN118726509A

公开(公告)日：2024-10-01

申请号：CN202410765154.3

申请日：2024-06-14

Applicant: 江苏海洋大学 ,  江苏联宇医疗器械有限公司 ,  连云港博凯莱特生物科技有限公司

Inventor： 张坤晓 ,  张文文 ,  邱敏 ,  谢宝柱 ,  季鸿宇 ,  孙恒 ,  孙玉倩 ,  耿楠 ,  钟继国 ,  侯玉婷 ,  梁蕊 ,  夏雨

IPC: C12P19/26 ,  C12N15/70 ,  C12N9/80 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种用脱乙酰酶催化高效合成氨基葡萄糖的方法，包括以下步骤：以乙酰氨基葡萄糖GlcNAc为底物，加入含有脱乙酰酶的蛋白液，在pH5.0～9.0、温度30～70℃条件下反应，即得氨基葡萄糖；所述脱乙酰酶的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1～4。本发明通过重组表达获得了一种耐热性好、对GlcNAc转化率高的脱乙酰酶蛋白，转化率可达95％以上，实现了对氨基葡萄糖的高效生物合成。

公开(公告)号：CN115992107A

公开(公告)日：2023-04-21

申请号：CN202310148579.5

申请日：2023-02-22

Applicant: 江苏海洋大学 ,  广州市普森生物科技有限公司

Inventor： 侯学雯 ,  郭之彬 ,  张坤晓 ,  李梦磊 ,  叶蕾

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12P7/6436 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种酮还原酶。本发明还公开了其在体外生物合成(R)‑6‑羟基‑8‑氯辛酸乙酯中的应用。其作为生物催化剂，将8‑氯‑6‑氧代辛酸乙酯转化为(R)‑6‑羟基‑8‑氯辛酸乙酯，有极佳的手性选择性，将相应手性带入合成路线，极大降低了生产成本，消除了副产物处理过程中产生的环境影响，且操作简单，条件温和，耗时较短，转化率和产物纯度均在87%以上，适合产业化应用。

公开(公告)号：CN114214295B

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202111413972.X

申请日：2021-11-25

Applicant: 江苏海洋大学

Inventor： 张坤晓 ,  侯学雯 ,  杨玉梅 ,  叶佳琪

IPC: C12N9/04 ,  C12P17/16

Abstract: 本发明涉及化合物合成技术领域，具体涉及一种羰基还原酶及合成(S)‑3‑(二甲氨基)‑1‑(2‑噻吩基)‑1‑丙醇的方法。本发明以以3‑二甲氨基‑1‑(‑噻吩基)‑1‑丙酮盐酸盐为原料在无机盐溶液环境中加入羰基还原酶、葡萄糖脱氢酶组合物、辅酶因子、供氢体，在25‑40℃、pH值为6.8‑7.2条件下反应得到目标产物(S)‑3‑(二甲氨基)‑1‑(2‑噻吩基)‑1‑丙醇；所述的羰基还原酶的核苷酸序列如SEDQ ID NO.1所示，所述葡萄糖脱氢酶的核苷酸序列如SEDQ ID NO.2所示。本发明的方法操作简单，条件温和，产率高，选择性好，耗时短，成本较低，适合产业化应用。