一种高表达目的基因的重组枯草芽孢杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN119931909A

    公开(公告)日:2025-05-06

    申请号:CN202411871526.7

    申请日:2024-12-18

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明涉及一种高表达目的基因的重组枯草芽孢杆菌及其应用。本发明首先将噬菌体来源的T7RNA聚合酶整合至枯草芽孢杆菌基因组的amyE位点,并从枯草芽孢杆菌基因组不同区域的28个位点中筛选出4个表达活性最高的整合位点zinU、prtG、glpT、sfrAA,在这些位点对PT7启动子驱动的目的基因表达框及转录抑制蛋白LacI进行整合;其次对LacI进行突变体筛选,筛选出3个不同突变位点,在无需诱导剂的情况下即可大量合成目标蛋白。最后,将其应用于绿色荧光蛋白、透明质酸酶和透明质酸基因组的整合表达,分别获得高荧光活性、高透明质酸酶酶活和透明质酸稳定生产。本发明发酵表达过程中无需添加抗生素和诱导剂,使其成为合成生物学、酶工程和相关应用的有力工具。

    一种高效表达磷脂酶D的方法及应用

    公开(公告)号:CN118931874A

    公开(公告)日:2024-11-12

    申请号:CN202411100911.1

    申请日:2024-08-12

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明涉及一种高效表达磷脂酶D的方法及应用,属于基因工程技术领域。本发明通过表达元件共优化策略,实现了磷脂酶D的高效分泌表达,胞外酶活达到4055.9U/mL,相较于未改造菌株,酶活提高了43.6倍。本发明还根据此表达体系,通过整合位点筛选和多拷贝整合策略,首次实现了磷脂酶D的整合表达,整合菌株胞外酶活达到392.9U/mL。本发明的磷脂酶D具有良好的催化活性,能在水相条件下以大豆卵磷脂为底物高效合成磷脂酸。重组菌株酶活稳定性好、发酵周期短、催化效率高,为大规模工业化生产奠定了基础,表明该菌株在磷脂类衍生物的生物合成领域具有潜在应用价值。同时,整合菌株避免了发酵过程中抗生素的添加,拓宽了菌株的应用范围。

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