公开(公告)号：CN109825466A

公开(公告)日：2019-05-31

申请号：CN201910284685.X

申请日：2019-04-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 王颖兰 ,  蒋自航 ,  刘思宇 ,  冯焱 ,  李兆丰

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N9/28 ,  C12P19/14 ,  C12P19/04 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种直链麦芽五糖生成酶在枯草芽孢杆菌中分泌表达的方法，属于酶工程技术领域。本发明通过构建G5-淀粉酶的枯草芽孢杆菌分泌表达系统，并对基因工程菌的摇瓶发酵条件进行优化，最终确定较佳培养基组成为：酵母粉30g/L，玉米淀粉6g/L，KH2PO42.3g/L，K2HPO412.5g/L，pH 7.5。在发酵温度37℃，200r/min下振荡培养48h后酶活达451.1U/mL，比初始培养条件下的酶活水平提高了127.5％，比文献报道水平提高了10.9倍。

公开(公告)号：CN108300749A

公开(公告)日：2018-07-20

申请号：CN201810219837.3

申请日：2018-03-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 李兆丰 ,  顾正彪 ,  潘思惠 ,  李才明 ,  王颖兰 ,  程力 ,  洪雁

IPC: C12P19/14 ,  A23L33/125 ,  A23L29/30 ,  A61K31/702 ,  A61P3/02

Abstract: 本发明涉及一种用双酶法制备直链麦芽五糖的方法，属于功能糖生产技术领域。所用直链麦芽低聚糖生成酶的氨基酸序列在GenBank中的编号为AIV43245.1，所用普鲁兰酶购自日本天野酶制剂集团。配制pH 5.5～6.5的淀粉或麦芽糊精溶液为底物，按50～100U/g加酶量加入直链麦芽低聚糖生成酶，按2～5U/g加酶量加入普鲁兰酶，于60～70℃下反应24～72小时后得到直链麦芽低聚糖浆，转化率(以葡萄糖～直链麦芽七糖计)达90％以上。其中主产物为直链麦芽五糖，百分比例可达40％以上。本发明所用的两种酶可同时加入，不需要中途调节反应温度或pH，也不需要α-淀粉酶液化底物，不需要添加钙离子，生产工艺简单、安全且经济，具有较大的应用价值。

公开(公告)号：CN107119026A

公开(公告)日：2017-09-01

申请号：CN201710244539.5

申请日：2017-04-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 李阳 ,  李兆丰 ,  任俊彦 ,  刘佳 ,  孙璐 ,  王颖兰 ,  刘冰洁 ,  贾瑞

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/107 ,  C12N15/70 ,  C12Y204/01018

Abstract: 本发明公开了一种提高淀粉分支酶在大肠杆菌中胞外分泌表达的方法，属于酶工程技术领域。在基因工程菌E.coli BL21(pET‑20b(+)/gbe)发酵生产淀粉分支酶的过程中，于某一时间点改变诱导温度，实现变温发酵，提高分支酶的胞外产量。本发明通过多阶段诱导温度策略促进淀粉分支酶的胞外表达，避免了胞内表达后破壁这一步骤，降低工业成本。

公开(公告)号：CN116334159A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202211009956.9

申请日：2022-08-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 李兆丰 ,  段凯文 ,  王颖兰 ,  李才明 ,  班宵逢 ,  顾正彪 ,  程力 ,  洪雁

IPC: C12P19/00 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N15/52 ,  C12N15/62 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种提高麦芽四糖产量的方法，属于基因工程和生物技术。本发明提供的直链麦芽低聚糖生成酶MFAPS‑ΔCBM酶活为310U/mL，比酶活为1802U/mg，相较于野生型(230U/mL，1200U/mg)分别提高了34.8％和50.2％。本发明通过将来源于Pseudomonassaccharophila的直链麦芽低聚糖生成进行突变得到产物中麦芽四糖占比提高的直链麦芽低聚糖生成酶MFAPS‑ΔCBM，其催化得到的产物中麦芽四糖占比达到了73.1％，具有良好的工艺适应性，在生物领域具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN108300749B

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN201810219837.3

申请日：2018-03-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 李兆丰 ,  顾正彪 ,  潘思惠 ,  李才明 ,  王颖兰 ,  程力 ,  洪雁

IPC: C12N9/26 ,  C12P19/14 ,  A23L33/125 ,  A23L29/30 ,  A61K31/702 ,  A61P3/02

Abstract: 本发明涉及一种用双酶法制备直链麦芽五糖的方法，属于功能糖生产技术领域。所用直链麦芽低聚糖生成酶的氨基酸序列在GenBank中的编号为AIV43245.1，所用普鲁兰酶购自日本天野酶制剂集团。配制pH 5.5～6.5的淀粉或麦芽糊精溶液为底物，按50～100U/g加酶量加入直链麦芽低聚糖生成酶，按2～5U/g加酶量加入普鲁兰酶，于60～70℃下反应24～72小时后得到直链麦芽低聚糖浆，转化率(以葡萄糖～直链麦芽七糖计)达90％以上。其中主产物为直链麦芽五糖，百分比例可达40％以上。本发明所用的两种酶可同时加入，不需要中途调节反应温度或pH，也不需要α‑淀粉酶液化底物，不需要添加钙离子，生产工艺简单、安全且经济，具有较大的应用价值。