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公开(公告)号：CN110607319A
公开(公告)日：2019-12-24
申请号：CN201911040157.6
申请日：2019-10-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于枯草芽孢杆菌分泌表达蛋白的表达载体及应用，属于基因工程和生物技术领域。该分泌载体是将编码信号肽SPphoD的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1)和编码分子伴侣PrsA的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.3)分别连接到pMA5-P43上构建分泌质粒pMA5-SPP。以pMA5-SPP为载体，在枯草芽孢杆菌中表达L-天冬酰胺酶，其胞外分泌量占总表达量的38％，胞外分泌量是常见信号肽SPpel介导下分泌量的2.95倍。
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公开(公告)号：CN108103049A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711354028.5
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
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公开(公告)号：CN108094976B
公开(公告)日：2020-03-06
申请号：CN201711354014.3
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株嗜热L‑天冬酰胺酶在高温油炸食品中的应用，属于酶工程领域和食品应用领域。本发明酶为SEQIDN0.1所示的氨基酸序列，将其应用到炸薯条之中。本发明将薯条浸没于嗜热L‑天冬酰胺酶突变株的酶溶液中，在85℃下处理5分钟,降低了样品中丙烯酰胺含量76％。该发明展现了该L‑天冬酰胺酶突变株在油炸食品工业中应用的潜能。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108094976A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711354014.3
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株嗜热L‑天冬酰胺酶在高温油炸食品中的应用，属于酶工程领域和食品应用领域。本发明酶为SEQIDN0.1所示的氨基酸序列，将其应用到炸薯条之中。本发明将薯条浸没于嗜热L‑天冬酰胺酶突变株的酶溶液中，在85℃下处理5分钟,降低了样品中丙烯酰胺含量76％。该发明展现了该L‑天冬酰胺酶突变株在油炸食品工业中应用的潜能。
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公开(公告)号：CN107828768A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711328978.0
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/82 , C12N15/55 , C12N1/21 , C12N15/75 , A61K38/50 , A61P35/02 , A61P35/00 , A23L5/20 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程、酶工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的核苷酸的基础上，将其编码的第298位赖氨酸突变成亮氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白，得到的突变体最适温度从95℃降低到85℃，最适pH从8降低到7，Km值从6.5降低到4.9，比酶活突变前后无变化。本发明表明298位赖氨酸残基对酶底物亲和性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN110607319B
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN201911040157.6
申请日：2019-10-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于枯草芽孢杆菌分泌表达蛋白的表达载体及应用，属于基因工程和生物技术领域。该分泌载体是将编码信号肽SPphoD的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1)和编码分子伴侣PrsA的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.3)分别连接到pMA5‑P43上构建分泌质粒pMA5‑SPP。以pMA5‑SPP为载体，在枯草芽孢杆菌中表达L‑天冬酰胺酶，其胞外分泌量占总表达量的38％，胞外分泌量是常见信号肽SPpel介导下分泌量的2.95倍。
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公开(公告)号：CN107828768B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201711328978.0
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/82 , C12N15/55 , C12N1/21 , C12N15/75 , A61K38/50 , A61P35/02 , A61P35/00 , A23L5/20 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程、酶工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的核苷酸的基础上，将其编码的第298位赖氨酸突变成亮氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白，得到的突变体最适温度从95℃降低到85℃，最适pH从8降低到7，Km值从6.5降低到4.9，比酶活突变前后无变化。本发明表明298位赖氨酸残基对酶底物亲和性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN108103049B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201711354028.5
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
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