一种嗜热L-天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法

    公开(公告)号:CN108103049A

    公开(公告)日:2018-06-01

    申请号:CN201711354028.5

    申请日:2017-12-15

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法,属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中,以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板,以易错PCR技术构建突变文库,并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法,筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基,构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A,其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段,提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵,L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。

    一种嗜热L-天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法

    公开(公告)号:CN108103049B

    公开(公告)日:2020-08-04

    申请号:CN201711354028.5

    申请日:2017-12-15

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法,属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中,以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板,以易错PCR技术构建突变文库,并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法,筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基,构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A,其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段,提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵,L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。

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