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公开(公告)号：CN109266635A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201811384656.2
申请日：2018-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明在天然L-天冬酰胺酶的基础上，通过定点突变生物技术改造L-天冬酰胺酶分子结构，L-天冬酰胺酶突变体的纯酶液酶活提高至2037.13U/mg，较原始酶酶活(约1483.81U/mg)相比提高了约37.3％。本发明表明第22位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的在食品行业中的应用潜力。
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公开(公告)号：CN108103049A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711354028.5
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
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公开(公告)号：CN108103049B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201711354028.5
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
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公开(公告)号：CN109266635B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201811384656.2
申请日：2018-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明在天然L‑天冬酰胺酶的基础上，通过定点突变生物技术改造L‑天冬酰胺酶分子结构，L‑天冬酰胺酶突变体的纯酶液酶活提高至2037.13U/mg，较原始酶酶活(约1483.81U/mg)相比提高了约37.3％。本发明表明第22位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的在食品行业中的应用潜力。
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