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公开(公告)号：CN106929462B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201710278055.2
申请日：2017-04-25
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12P19/26 , A23L33/135 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种积累N‑乙酰神经氨酸重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于遗传工程领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168ΔnagPΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔ1dhΔpta::lox72)作为表达宿主，通过过量共表达来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae S288C)的氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因GNA1，来源于念珠藻(Anabaena sp.CH1)的N‑乙酰氨基葡萄糖异构酶(AGE)和来源于大肠杆菌(Escherichia coli K1)的N‑乙酰神经氨酸合酶(NeuB)，得到了积累N‑乙酰神经氨酸枯草芽孢杆菌基因工程菌，N‑乙酰神经氨酸产量达到190mg/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108424868B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201810239281.4
申请日：2018-03-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用天然双碳源高产N‑乙酰神经氨酸的重组菌，属于遗传工程领域。本发明通过强启动子P43过表达磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因PckA，利用葡萄糖、L‑苹果酸钠天然双碳源发酵，实现N‑乙酰神经氨酸合成途径中磷酸烯醇式丙酮酸的高效供给，以加强合成途径，本发明的重组枯草芽孢杆菌与出发菌株相比，其N‑乙酰神经氨酸产量从1.15g/L提高到1.65g/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111411066A
公开(公告)日：2020-07-14
申请号：CN202010238266.5
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种双途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及构建方法，属于遗传工程领域。本发明通过将N-乙酰神经氨酸合酶和N-乙酰神经氨酸醛缩酶同时整合到基因组上表达，并选取3个不同强度启动子对NeuB和NanA基因进行表达量优化，最终产量在摇瓶中达到了8.3g/L，为进一步提高枯草芽孢杆菌N-乙酰神经氨酸产量奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111411065A
公开(公告)日：2020-07-14
申请号：CN202010237111.X
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于人工双碳源的产N-乙酰神经氨酸的重组菌，属于遗传工程领域。本发明通过在枯草芽孢杆菌中以启动子P6过表达甘油激酶，并强化氨基葡萄糖-6-磷酸-N-乙酰基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖异构酶，使重组枯草芽孢杆菌可以葡萄糖和甘油双碳源生长、合成，并提高N-乙酰神经氨酸的产量，使摇瓶水平下的产量提高至8.7g/L。
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公开(公告)号：CN110093366A
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201910368345.5
申请日：2019-05-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌葡萄糖酸盐诱导表达元件及构建方法，属于遗传工程领域。本发明以组成型启动子PlytE表达转录调控蛋白GntR，进一步通过在组成型启动子PthrS中，整合转录调控蛋白GntR结合序列，实现以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168为宿主时，添加葡萄糖酸盐后，达到较高强度的诱导表达水平和较低的泄漏表达水平，其诱导表达强度达到22500a.u.，泄漏量从15.6％降低至3.0％，为筛选基因工程菌或调控蛋白表达奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110029109A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201910358479.9
申请日：2019-04-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种唾液酸诱导表达元件及应用，属于遗传工程领域。本发明以pHT质粒为载体，在枯草芽孢杆菌中，PydjO启动子表达转录调控蛋白NanR，优化整合NanR识别结合序列的强启动子Pveg，实现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168在含有唾液酸的环境下极低水平的泄漏表达，可使泄露表达率降低至2％左右，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN108441461A
公开(公告)日：2018-08-24
申请号：CN201810239293.7
申请日：2018-03-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用人工双碳源高产N-乙酰神经氨酸的重组菌，属于遗传工程领域。本发明是通过强启动子P43过表达葡萄糖酸激酶基因gntK和葡萄糖酸透性酶gntP，利用葡萄糖、葡萄糖酸钠人工双碳源发酵，实现N-乙酰神经氨酸合成途径中磷酸烯醇式丙酮酸的高效供给，以加强合成途径，本发明的重组枯草芽孢杆菌与出发菌株相比，其N-乙酰神经氨酸产量从1.02g/L提高到1.52g/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N-乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114958886A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210285680.0
申请日：2022-03-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种简便的基因合成方法，属于遗传工程领域领域。本发明提供了一种利用太极组装构建质粒的方法，首先通过两步法融合PCR缩短了大片段目的基因合成所需的时间，有效提高了大片段目的基因的合成成功率，进一步的，通过太极组装的方法构建质粒，简化了传统无缝克隆需要进行片段纯化的步骤，有效缩短质粒构建时间，并提高了大片段目的基因构建质粒的成功率。
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公开(公告)号：CN111394410B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202010238268.4
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高催化活性神经氨酸合酶及应用，属于遗传工程领域。本发明通过筛选不同来源的N‑乙酰神经氨酸合酶，并以5个不同强度启动子优化N‑乙酰神经氨酸合酶在基因组上的表达水平，将最佳表达强度的NeuB整合到可以合成NeuAc前体物质ManNAc的菌株中，提高了枯草芽孢杆菌的N‑乙酰神经氨酸产量使N‑乙酰神经氨酸在摇瓶中产量达到7.6g/L。
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公开(公告)号：CN110029109B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201910358479.9
申请日：2019-04-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种唾液酸诱导表达元件及应用，属于遗传工程领域。本发明以pHT质粒为载体，在枯草芽孢杆菌中，PydjO启动子表达转录调控蛋白NanR，优化整合NanR识别结合序列的强启动子Pveg，实现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168在含有唾液酸的环境下极低水平的泄漏表达，可使泄露表达率降低至2％左右，具有广泛的应用前景。
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