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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113684202A
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202110957544.7
申请日：2021-08-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种安全无毒的高通量无缝构建质粒的方法，属于遗传工程领域。本发明通过优化组装溶液成分，排除现有方法中存在有毒试剂二硫苏糖醇，以及DNA聚合酶、DNA连接酶、NAD等较昂贵的试剂。由于不需要DNA纯化操作，使得该方法适用于基于96孔PCR板或96孔酶标板等的高通量操作平台。同时，太极组装4个片段构建质粒时，拥有95％以上的阳性率，在高通量构建质粒实验中，可以省略菌落PCR验证步骤，进一步简化高通量质粒构建流程。
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公开(公告)号：CN118440833A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410588945.3
申请日：2024-05-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种通过改造内质网提高卵清蛋白产量的酿酒酵母，属于基因工程技术领域。本发明在酿酒酵母CEN.PK2‑1C中异源表达卵清蛋白编码基因，并在卵清蛋白的N端上游插入INU1信号肽，以实现卵清蛋白的胞外分泌；之后使用荧光蛋白表征内质网中未折叠蛋白反应，在酿酒酵母中选用强度不同的启动子共表达分子伴侣Kar2和PDI，以促进内质网的折叠；敲除opi1基因，提高产物分泌量；过表达转录因子INO2和INO4，使内质网扩张，增加酿酒酵母的蛋白质合成能力并促进了卵清蛋白的合成。构建得到的酿酒酵母发酵生产72小时卵清蛋白的产量达到6.2mg/L。
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公开(公告)号：CN119979587A
公开(公告)日：2025-05-13
申请号：CN202411952239.9
申请日：2024-12-27
Abstract: 本发明涉及酿酒酵母半乳糖诱导型启动子、表达载体及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种提高半乳糖诱导型启动子在酿酒酵母中表达强度的方法，在半乳糖诱导型启动子PGAL1插入1‑7个上游激活序列，所涉及的上游激活序列来源于不同类型的酵母半乳糖诱导型启动子，并在此基础上分别构建了半乳糖诱导型单向和双向启动子文库及表达载体，通过筛选得到的最佳单向诱导型启动子UIP‑A2，其强度为PGAL1的2.37倍，最佳双向诱导型启动子在两个方向上的诱导强度分别为改造前的6.02倍和3.87倍，使用本发明提供的方法能显著提升半乳糖诱导型启动子在酿酒酵母中的表达强度，为酿酒酵母高效表达外源基因提供了有力的工具，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN114958886A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210285680.0
申请日：2022-03-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种简便的基因合成方法，属于遗传工程领域领域。本发明提供了一种利用太极组装构建质粒的方法，首先通过两步法融合PCR缩短了大片段目的基因合成所需的时间，有效提高了大片段目的基因的合成成功率，进一步的，通过太极组装的方法构建质粒，简化了传统无缝克隆需要进行片段纯化的步骤，有效缩短质粒构建时间，并提高了大片段目的基因构建质粒的成功率。
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公开(公告)号：CN113684202B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202110957544.7
申请日：2021-08-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种安全无毒的高通量无缝构建质粒的方法，属于遗传工程领域。本发明通过优化组装溶液成分，排除现有方法中存在有毒试剂二硫苏糖醇，以及DNA聚合酶、DNA连接酶、NAD等较昂贵的试剂。由于不需要DNA纯化操作，使得该方法适用于基于96孔PCR板或96孔酶标板等的高通量操作平台。同时，太极组装4个片段构建质粒时，拥有95％以上的阳性率，在高通量构建质粒实验中，可以省略菌落PCR验证步骤，进一步简化高通量质粒构建流程。
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