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公开(公告)号：CN117025432B
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202311030579.1
申请日：2023-08-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种组成型表达人透明质酸酶的毕赤酵母及其应用。本发明在保持人透明质酸酶PH‑20核心功能序列的基础上，首先对其信号肽序列进行替换，使rhPH‑20分泌表达水平提升20％；进一步对共翻译内质网转运途径进行针对性强化，使分泌表达提升48％；之后，通过强化内质网未折叠蛋白响应使分泌表达进一步提升31％。最终，经5‑L发酵罐培养，三步改造后的重组菌OE54‑ScHAC1分泌表达rhPH‑20产量达到19.82U·mL‑1，相较出发总共提升约9.38倍，为目前酵母体系组成型表达最高水平。
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公开(公告)号：CN116286764B
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202310217653.4
申请日：2023-03-08
Applicant: 江南大学 , 山东焦点福瑞达生物股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种透明质酸裂解酶及其重组菌与应用。本发明提供了一种来源于弗氏柠檬酸杆菌的透明质酸裂解酶，克隆了其编码基因并在大肠杆菌体系实现了重组表达，经过启动子优4化后酶活为2.64×10 U/mL，蛋白分子量为87kDa。酶学性质表征实验表明其为内切酶，能够在pH 5‑8范围内发挥透明质酸降解作用，最适反应pH为5.5，最适反应温度为37℃。该酶具有良好的热稳定性，pH稳定性与耐盐性，可以耐受1.5M的氯化钠溶液。该酶对透明质酸有着较高的底物特异性。本发明利用优化的培养基，在5‑L发酵罐中，重组菌产透明质酸裂解酶的最高活性在14h6可达2.65×10U/mL。
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公开(公告)号：CN116286764A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310217653.4
申请日：2023-03-08
Applicant: 江南大学 , 山东焦点福瑞达生物股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种透明质酸裂解酶及其重组菌与应用。本发明提供了一种来源于弗氏柠檬酸杆菌的透明质酸裂解酶，克隆了其编码基因并在大肠杆菌体系实现了重组表达，经过启动子优化后酶活为2.64×104U/mL，蛋白分子量为87kDa。酶学性质表征实验表明其为内切酶，能够在pH 5‑8范围内发挥透明质酸降解作用，最适反应pH为5.5，最适反应温度为37℃。该酶具有良好的热稳定性，pH稳定性与耐盐性，可以耐受1.5M的氯化钠溶液。该酶对透明质酸有着较高的底物特异性。本发明利用优化的培养基，在5‑L发酵罐中，重组菌产透明质酸裂解酶的最高活性在14h可达2.65×106U/mL。
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公开(公告)号：CN117025432A
公开(公告)日：2023-11-10
申请号：CN202311030579.1
申请日：2023-08-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种组成型表达人透明质酸酶的毕赤酵母及其应用。本发明在保持人透明质酸酶PH‑20核心功能序列的基础上，首先对其信号肽序列进行替换，使rhPH‑20分泌表达水平提升20％；进一步对共翻译内质网转运途径进行针对性强化，使分泌表达提升48％；之后，通过强化内质网未折叠蛋白响应使分泌表达进一步提升31％。最终，经5‑L发酵罐培养，三步改造后的重组菌OE54‑ScHAC1分泌表达rhPH‑20产量达到19.82U·mL‑1，相较出发总共提升约9.38倍，为目前酵母体系组成型表达最高水平。
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