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公开(公告)号：CN116286764A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310217653.4
申请日：2023-03-08
Applicant: 江南大学 , 山东焦点福瑞达生物股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种透明质酸裂解酶及其重组菌与应用。本发明提供了一种来源于弗氏柠檬酸杆菌的透明质酸裂解酶，克隆了其编码基因并在大肠杆菌体系实现了重组表达，经过启动子优化后酶活为2.64×104U/mL，蛋白分子量为87kDa。酶学性质表征实验表明其为内切酶，能够在pH 5‑8范围内发挥透明质酸降解作用，最适反应pH为5.5，最适反应温度为37℃。该酶具有良好的热稳定性，pH稳定性与耐盐性，可以耐受1.5M的氯化钠溶液。该酶对透明质酸有着较高的底物特异性。本发明利用优化的培养基，在5‑L发酵罐中，重组菌产透明质酸裂解酶的最高活性在14h可达2.65×106U/mL。
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公开(公告)号：CN116286764B
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202310217653.4
申请日：2023-03-08
Applicant: 江南大学 , 山东焦点福瑞达生物股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种透明质酸裂解酶及其重组菌与应用。本发明提供了一种来源于弗氏柠檬酸杆菌的透明质酸裂解酶，克隆了其编码基因并在大肠杆菌体系实现了重组表达，经过启动子优4化后酶活为2.64×10 U/mL，蛋白分子量为87kDa。酶学性质表征实验表明其为内切酶，能够在pH 5‑8范围内发挥透明质酸降解作用，最适反应pH为5.5，最适反应温度为37℃。该酶具有良好的热稳定性，pH稳定性与耐盐性，可以耐受1.5M的氯化钠溶液。该酶对透明质酸有着较高的底物特异性。本发明利用优化的培养基，在5‑L发酵罐中，重组菌产透明质酸裂解酶的最高活性在14h6可达2.65×10U/mL。
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公开(公告)号：CN117025703A
公开(公告)日：2023-11-10
申请号：CN202311040257.5
申请日：2023-08-17
Applicant: 山东焦点福瑞达生物股份有限公司 , 江南大学 , 山东百阜福瑞达制药有限公司
Inventor： 廉少杰 , 康传利 , 刘磊 , 郑德强 , 史劲松 , 许正宏 , 钱建瑛 , 龚劲松 , 蒋敏 , 李恒 , 苏畅 , 王春喜 , 李庆 , 李取泉 , 张美霞 , 汤丽伟 , 杜帅 , 刘蔷
Abstract: 本发明公开了一种分子量分布集中的透明质酸纳的生产方法，属生物发酵领域，本方法将产透明质酸菌接入至发酵罐进行三段培养，在30.0～37.0℃，通气量0.5～1.0vvm条件下，培养1～8h；在38.0～45.0℃，通气量1.0～2.0vvm条件下，培养8～16h；在30.0～35.0℃，通气量1.0～2.0vvm条件下培养至发酵结束；当产透明质酸菌OD620达到1.0时，流加控制发酵液中碳源质量体积浓度为5.0～20.0g/L，直至每升发酵液添加碳源总量为80.0～110.0g。本方法采用不同温度、通气量和培养时间的三段培养，并流加控制碳源来控制透明质酸钠合成，减少分子量合成过于分散，得到分子量分布宽度为1.10～1.85的透明质酸钠；且当发酵液中尿素与蛋白胨为1:2时，分子量分布宽度达1.10，本透明质酸钠肤感和感官特性更好，舒缓功效好，可应用于食品、化妆品等领域。
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公开(公告)号：CN116179386B
公开(公告)日：2025-04-29
申请号：CN202310247280.5
申请日：2023-03-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种表达右旋糖酐酶的毕赤酵母重组菌株及其应用。本发明通过系统改造启动子、信号肽及共表达分子伴侣，成功实现了高水平胞外表达右旋糖酐酶，胞外酶活达到159.68U/mL，相较于未改造的出发菌株，酶活提高了2.1倍。进一步通过5L罐上放大发酵，酶活力达到了3257.23U/mL。
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公开(公告)号：CN118440939A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410523410.8
申请日：2024-04-28
Applicant: 赛诺根生物科学有限公司 , 江南大学 , 国药赛诺根生物科学(北京)有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12P19/30 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开一种启动子突变体及其应用。本发明基于启动子PsrfA，通过对其核心区域以及两核心区域的间隔序列进行突变，获得了诱导表达活性较野生型提高的PsrfA启动子突变体，同时还提供了含所述启动子突变体的载体。利用本发明所述启动子突变体或所述载体，可提高所表达的蛋白的表达量，在蛋白表达领域具有广阔应用前景。同时，在所述启动子突变体的基础上，本发明还提供了一种NADH焦磷酸酶表达量提高的重组质粒和重组菌，可将其用于还原型烟酰胺单核苷酸的生物催化反应中，有利于还原型烟酰胺单核苷酸的大规模高效生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114574469B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202210298614.7
申请日：2022-03-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于定向进化改造的角蛋白酶突变体及其应用，本发明提供了一种基于易错PCR技术，定向进化获得高酶活突变体的方法。本发明共获得了9个酶活提高的突变体，其中突变体T8(R72S/F107Y/N291S/N295D)的酶活水平最高，为2382U/mL，是对照菌酶活的2.1倍。采用培养基组分优化及7L发酵罐扩大培养的发酵研究策略，实现了突变菌产酶量的提升，角蛋白酶活力可达8448U/mL，本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效的策略。采用角蛋白酶与胰蛋白酶复配降解角蛋白废弃物，探究酶解法的最佳条件，为实际生产中高效利用羽毛、提高蛋白利用率提供了理论基础。
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公开(公告)号：CN111763676B
公开(公告)日：2022-10-04
申请号：CN202010700315.2
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50 , C12R1/125 , C12R1/085 , C12R1/10 , C12R1/11 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了一种提高角蛋白酶异源表达酶活的启动子及其应用，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN114920826A
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN202210685024.X
申请日：2022-06-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种III型类人胶原蛋白及其编码基因、表达载体和重组酵母菌，本发明在保持人源Ⅲ型胶原蛋白的Gly‑X‑Y基本骨架基础上对其进行改造，提供一种亲水性较好的Ⅲ型类人胶原蛋白(hlCOLⅢ)，该Ⅲ型类人胶原蛋白能够在毕赤酵母中可溶性分泌表达，并进一步通过启动子改造、高拷贝菌株筛选、发酵优化及高密度发酵等技术实现hlCOLⅢ的高产。
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公开(公告)号：CN113528493A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110592639.3
申请日：2021-05-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体及应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明的突变体为A165E、Q170T、N292F、L190Q、H92N和S171G，上述突变体在较好的保持催化活性的基础上使热稳定性获得不同程度提升，其中Q170T突变体具有最优热稳定性，在60℃的半衰期由野生型的17.3min提升到38.5min。六个位点组合突变体的半衰期显著改善至66.1min，最适反应温度由40℃提高至60℃。突变体的催化活性和热稳定性均较好，较野生型角蛋白酶更具应用价值和潜力。并且基于计算机辅助分析的蛋白质热稳定性提升方法可以成为工业酶热稳定性改造的通用途径。
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公开(公告)号：CN107828765B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201711058163.5
申请日：2017-11-01
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/52
Abstract: 本发明公开了热稳定性提升的角蛋白酶突变体及其应用，属于工业生物技术领域。将来源于Brevibacillus parabrevis CGMCC No.10798的角蛋白酶第181位天冬酰胺、第218位酪氨酸、第236位丝氨酸进行定点突变改造，并对上述位点进行随机组合制备获得组合突变体。本发明实现了角蛋白酶热稳定性的1～4.09倍的显著提高，具有良好的理论价值和应用前景。
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