公开(公告)号：CN115335536B

公开(公告)日：2024-09-20

申请号：CN202280002216.4

申请日：2022-01-07

Applicant: 武汉大学

Inventor： 殷昊 ,  芦舒涵 ,  张楹 ,  佟晓晗 ,  张坤 ,  周溪 ,  张定宇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/686 ,  C12N9/22 ,  C12Q1/6897 ,  C12R1/93

Abstract: 提供了用于简单、无仪器且灵敏的方法的组合物和方法，该方法能够对目的核酸分子进行快速、即时检测。这基于一个令人惊讶的发现，即扩增及基于CRISPR的切割和检测的相对效率可以调整为利于扩增，直到生成足够的扩增产物实现检测。示例方法包括设计向导RNA和引物以靶向非最优PAM序列，或序列工程化Cas核酸酶以降低其在与该向导RNA形成核糖核蛋白或者结合或切割底物核酸方面的活性。

公开(公告)号：CN117737208B

公开(公告)日：2024-09-10

申请号：CN202311783425.X

申请日：2023-12-22

Applicant: 武汉大学

Inventor： 殷昊 ,  佟晓晗 ,  张楹 ,  张坤 ,  李天乐

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种用于室温检测RNA的组合物及试剂盒，该组合物包括：目标RNA的反转录引物和反转录酶，用于合成目标RNA的反向互补序列，反转录引物的长度为10～20个核苷酸；RPA反向引物、RPA正向引物、重组酶、DNA聚合酶、T7RNA聚合酶，用于扩增目标RNA的双链DNA扩增子，并以双链DNA扩增子为底物合成包含目标RNA的反向互补序列的长链RNA；双链DNA扩增子由目标RNA及其反向互补序列碱基互补配对形成，RPA反向引物的5’端包含T7RNA聚合酶启动子序列；Cas13a蛋白及其crRNA，crRNA用于靶向识别目标RNA的反向互补序列，Cas13a蛋白用于切割目标RNA的反向互补序列；TaqMan荧光探针，其能在目标RNA的反向互补序列被切割时被Cas13a蛋白非特异切割，释放荧光基团。该组合物能在20℃、30min内检测到0.5cp/μL的目标RNA。

公开(公告)号：CN115335536A

公开(公告)日：2022-11-11

申请号：CN202280002216.4

申请日：2022-01-07

Applicant: 武汉大学

Inventor： 殷昊 ,  芦舒涵 ,  张楹 ,  佟晓晗 ,  张坤 ,  周溪 ,  张定宇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/686 ,  C12N9/22 ,  C12Q1/6897 ,  C12R1/93

Abstract: 提供了用于简单、无仪器且灵敏的方法的组合物和方法，该方法能够对目的核酸分子进行快速、即时检测。这基于一个令人惊讶的发现，即扩增及基于CRISPR的切割和检测的相对效率可以调整为利于扩增，直到生成足够的扩增产物实现检测。示例方法包括设计向导RNA和引物以靶向非最优PAM序列，或序列工程化Cas核酸酶以降低其在与该向导RNA形成核糖核蛋白或者结合或切割底物核酸方面的活性。

公开(公告)号：CN119913238A

公开(公告)日：2025-05-02

申请号：CN202411221633.5

申请日：2022-01-07

Applicant: 武汉大学

Inventor： 殷昊 ,  芦舒涵 ,  张楹 ,  佟晓晗 ,  张坤 ,  周溪 ,  张定宇

IPC: C12Q1/6844 ,  C12N9/22

Abstract: 提供了用于简单、无仪器且灵敏的方法的组合物和方法，该方法能够对目的核酸分子进行快速、即时检测。这基于一个令人惊讶的发现，即扩增及基于CRISPR的切割和检测的相对效率可以调整为利于扩增，直到生成足够的扩增产物实现检测。示例方法包括设计向导RNA和引物以靶向非最优PAM序列，或序列工程化Cas核酸酶以降低其在与该向导RNA形成核糖核蛋白或者结合或切割底物核酸方面的活性。

公开(公告)号：CN119286993A

公开(公告)日：2025-01-10

申请号：CN202411221632.0

申请日：2022-01-07

Applicant: 武汉大学

Inventor： 殷昊 ,  芦舒涵 ,  张楹 ,  佟晓晗 ,  张坤 ,  周溪 ,  张定宇

IPC: C12Q1/6844 ,  C12N9/22

Abstract: 提供了用于简单、无仪器且灵敏的方法的组合物和方法，该方法能够对目的核酸分子进行快速、即时检测。这基于一个令人惊讶的发现，即扩增及基于CRISPR的切割和检测的相对效率可以调整为利于扩增，直到生成足够的扩增产物实现检测。示例方法包括设计向导RNA和引物以靶向非最优PAM序列，或序列工程化Cas核酸酶以降低其在与该向导RNA形成核糖核蛋白或者结合或切割底物核酸方面的活性。

公开(公告)号：CN117737208A

公开(公告)日：2024-03-22

申请号：CN202311783425.X

申请日：2023-12-22

Applicant: 武汉大学

Inventor： 殷昊 ,  佟晓晗 ,  张楹 ,  张坤 ,  李天乐

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种用于室温检测RNA的组合物及试剂盒，该组合物包括：目标RNA的反转录引物和反转录酶，用于合成目标RNA的反向互补序列，反转录引物的长度为10～20个核苷酸；RPA反向引物、RPA正向引物、重组酶、DNA聚合酶、T7RNA聚合酶，用于扩增目标RNA的双链DNA扩增子，并以双链DNA扩增子为底物合成包含目标RNA的反向互补序列的长链RNA；双链DNA扩增子由目标RNA及其反向互补序列碱基互补配对形成，RPA反向引物的5’端包含T7RNA聚合酶启动子序列；Cas13a蛋白及其crRNA，crRNA用于靶向识别目标RNA的反向互补序列，Cas13a蛋白用于切割目标RNA的反向互补序列；TaqMan荧光探针，其能在目标RNA的反向互补序列被切割时被Cas13a蛋白非特异切割，释放荧光基团。该组合物能在20℃、30min内检测到0.5cp/μL的目标RNA。