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公开(公告)号：CN106520832B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因‑IRES序列‑筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR‑启动子‑目的基因‑IRES序列‑筛选标记‑PolyA‑MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105695494B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201610272518.X
申请日：2016-04-27
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种三顺反子表达载体、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。三顺反子表达载体包括核基质结合区序列以及由两个内核糖体进入位点序列连接而成的三顺反子序列，三顺反子序列的结构为：启动子‑轻链信号肽SPL‑IRESwt‑重链信号肽SPH‑IRESatt‑筛选标记‑Poly A。该载体能同时表达抗体的轻链、重链以及筛选标记基因，克服传统载体重链、轻链及筛选标记基因表达不均衡的问题，提高抗体质量及阳性细胞克隆筛选率，同时载体上含有的核基质结合区序列还能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达，一方面提高抗体蛋白表达水平，另一方面提高后续单克隆抗体细胞株筛选的有效性。
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公开(公告)号：CN105695494A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610272518.X
申请日：2016-04-27
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种三顺反子表达载体、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。三顺反子表达载体包括核基质结合区序列以及由两个内核糖体进入位点序列连接而成的三顺反子序列，三顺反子序列的结构为：启动子-轻链信号肽SPL-IRESwt-重链信号肽SPH-IRESatt-筛选标记-Poly A。该载体能同时表达抗体的轻链、重链以及筛选标记基因，克服传统载体重链、轻链及筛选标记基因表达不均衡的问题，提高抗体质量及阳性细胞克隆筛选率，同时载体上含有的核基质结合区序列还能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达，一方面提高抗体蛋白表达水平，另一方面提高后续单克隆抗体细胞株筛选的有效性。
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公开(公告)号：CN106544361B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201611109050.9
申请日：2016-12-02
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MAR‑启动子‑外源基因‑Poly A、启动子‑外源基因‑Poly A‑TOP1 MAR或者TOP1 MAR‑启动子‑外源基因‑Poly A‑TOP1 MAR载体结构，一方面克服转基因沉默，另一方面介导外源基因在宿主细胞中稳定、高效、持久表达。同等条件下，与不含MAR以及含1‑68 MAR的载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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公开(公告)号：CN106544361A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201611109050.9
申请日：2016-12-02
Applicant: 新乡医学院
CPC classification number: C12N15/85 , C12N2800/107
Abstract: 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MAR-启动子-外源基因-Poly A、启动子-外源基因-Poly A-TOP1 MAR或者TOP1 MAR-启动子-外源基因-Poly A-TOP1 MAR载体结构，一方面克服转基因沉默，另一方面介导外源基因在宿主细胞中稳定、高效、持久表达。同等条件下，与不含MAR以及含1-68 MAR的载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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公开(公告)号：CN106520832A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因-IRES序列-筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR-启动子-目的基因-IRES序列-筛选标记-PolyA-MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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