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公开(公告)号：CN114958914B
公开(公告)日：2023-09-26
申请号：CN202210627448.0
申请日：2022-06-06
Applicant: 新乡医学院 , 新乡医学院第一附属医院
Abstract: 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。
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公开(公告)号：CN114958914A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210627448.0
申请日：2022-06-06
Applicant: 新乡医学院 , 新乡医学院第一附属医院
Abstract: 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。
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公开(公告)号：CN114214359B
公开(公告)日：2025-01-21
申请号：CN202111361923.6
申请日：2021-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法。包括以下步骤：（1）将目的基因重组载体与含细胞周期调控相关基因p18和/或调控细胞生长的基因aFGF的共转基因重组载体共转染CHO细胞；所述基因p18的序列如SEQ ID NO:1所示；所述基因aFGF的序列如SEQ ID NO:2所示；（2）将共转基因重组载体和目的基因重组载体共转染到CHO细胞中后，培养并筛选，得到CHO细胞表达系统；（3）将瞬时和稳定转染CHO细胞株进行悬浮无血清培养，得到目的蛋白。本发明方法可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的瞬时和稳定高水平表达。
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公开(公告)号：CN118599907A
公开(公告)日：2024-09-06
申请号：CN202410884991.8
申请日：2024-07-03
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了人源hDGKθ基因的过表达载体、过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞系及其构建方法，以及过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞系在外源重组蛋白表达中的应用。本发明以含Tol2转座子元件的载体为骨架，构建hDGKθ过表达质粒，通过转座酶的催化将hDGKθ整合到CHO细胞基因座中，可以实现CHO细胞中hDGKθ的稳定过表达，应用于构建重组蛋白表达系统时也能够提高重组蛋白表达量。这有效克服了目前CHO细胞表达系统存在的表达水平较低的问题，为重组蛋白的生产提供了方向。
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公开(公告)号：CN117660529A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311543756.6
申请日：2023-11-20
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及核酸构建体、表达载体、表达系统、及其应用。本发明提供的核酸构建体，不包括hCMV MIE启动子中的上游调控序列和核因子1结合位点簇序列，作为表达载体的启动子元件，构建重组蛋白表达载体和表达系统，提高重组蛋白稳定表达水平；本发明进一步优化内含子A序列，替换本发明提供核酸构建体形成的截短启动子的内含子A序列，同样能够提高重组蛋白稳定表达水平；并且优选的如SEQ ID NO：3所述的内含子A序列，与包含本发明提供的核酸构建体作为截短启动子的表达载体构建的CHO表达系统比较，能够更进一步提高重组蛋白稳定表达水平。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117165590A
公开(公告)日：2023-12-05
申请号：CN202311086417.X
申请日：2023-08-28
Applicant: 新乡医学院 , 常州南京大学高新技术研究院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/67 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种CMV合成启动子及其应用，属于基因工程技术领域。该启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。本发明的启动子能用于哺乳动物细胞表达载体构建，以驱动外源基因进行高效、持续、稳定的表达；将该表达载体应用于哺乳动物细胞目的蛋白的表达系统中，用于提高哺乳动物细胞目的蛋白的表达水平，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN114561413B
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202210301557.3
申请日：2022-03-24
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种瞬时转染试剂及其应用，属于细胞生物学和生物技术领域。本发明的瞬时转染试剂，包括聚乙烯亚胺盐酸盐溶液、氯化钠溶液和氯化镁溶液；聚乙烯亚胺盐酸盐溶液的浓度为0.8～1.2mg/mL，pH为6.9～7.1，聚乙烯亚胺盐酸盐为PEI MAX 40K；氯化钠溶液的浓度为4.8～5.3mol/L；氯化镁溶液的浓度为0.8～1.2mol/L。本发明的瞬时转染试剂用于细胞转染时，具有较高的转染效率。由于聚乙烯亚胺盐酸盐的浓度较低，本发明的瞬时转染试剂具有较低的毒性。本发明的瞬时转染试剂是一种价廉、毒性小、转染效率高的瞬时转染试剂，可用于重组蛋白生产和基因治疗等方面。
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公开(公告)号：CN116064560A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211271340.9
申请日：2022-10-18
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，本发明提供了一种提高哺乳动物细胞附着体载体转基因表达水平的方法。本发明方法利用优化后的SAF‑A基因构建辅助基因重组表达载体，先转染宿主细胞，经筛选得到稳定细胞株后，再转染外源基因表达载体，经稳定筛选，宿主细胞可稳定表达目的蛋白。通过实验验证，使用本发明的方法，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。
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公开(公告)号：CN112575031B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN201910935156.1
申请日：2019-09-29
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种遍在染色质开放表达元件、重组表达载体、表达系统及其制备方法、应用，属于生物技术领域。本发明中的遍在染色质开放表达元件(UCOE序列)是在分析人UCOE序列(GenBank accession no.D28877.1)的基础上，删除了HNRPA2B1启动子序列，形成672bp序列，并发现672bp序列存在隐蔽拼接位点，将455、493隐蔽拼接位点进行突变设计合成了一种新型的UCOE元件。与天然UCOE序列相比，本发明的UCOE序列在提高哺乳动物细胞转基因表达水平上效果更为显著。
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公开(公告)号：CN109628489B
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN201910012271.1
申请日：2019-01-07
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/67 , C12N15/113
Abstract: 本发明涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明中的方法应用CHO细胞内源miRNAs与3′‑UTR转录区互补结合来对筛选标记基因表达进行负性调节，进而提高目的基因的表达量。将miRNAs与3′‑UTR转录区克隆到筛选标记基因的下游，构建真核表达载体；然后将目的基因克隆到真核表达载体获得重组表达载体，然后将其转染细胞，获得CHO细胞表达系统，实现目的基因的高效表达。本发明的CHO细胞表达系统，可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的高产量稳定表达。
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