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公开(公告)号：CN117925715A
公开(公告)日：2024-04-26
申请号：CN202410100055.3
申请日：2024-01-24
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9构建Npc1及Npc1/Trem2基因敲除细胞系的方法，该细胞系采用以下步骤制备：靶点设计及sgRNA序列合成；载体构建；细胞转染；单克隆筛选；敲除细胞系鉴定后获得Npc1基因敲除成功的单克隆细胞系；在Npc1基因敲除的BV2细胞系基础上，重复上述步骤获得Npc1/Trem2双基因敲除成功的单克隆细胞系。本发明建立的Npc1及Npc1/Trem2基因敲除的BV2细胞系，将为深入研究C1型尼曼匹克病的疾病机制、基因功能及以Trem2为靶点进行干预等提供更直接有效的细胞研究和干预模型，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN108841865A
公开(公告)日：2018-11-20
申请号：CN201810616045.X
申请日：2018-06-14
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种小鼠脊髓体外电转基因方法、小鼠脊髓电转组织切片培养模型建立方法及其应用，属于神经系统基因功能研究技术领域。本发明小鼠脊髓体外电转基因方法，包括：将胚鼠从母鼠子宫中取出，剥离出所述胚鼠的脊髓，将含有目的基因的质粒注射到所述离体脊髓的脊髓腔内，然后将电转仪的电极放到脊髓的两侧，其中正极放到需要转染一侧，进行电转，得电转脊髓。将电转后的脊髓进行组织切片培养，利用该方法可以建立小鼠脊髓电转组织切片培养模型，为外源基因在小鼠胚胎发育过程在脊髓中对神经元的影响提供了一种新的研究方法，从而寻找治疗脊髓疾病的有效手段；该方法更适合神经元的动态变化观察，是介于活体与细胞之间的一种研究技术。
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公开(公告)号：CN103695311A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201310680758.X
申请日：2013-12-12
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种电转染装置及使用该装置的鸡胚视顶盖电转染方法，该电转染装置包括用于与电源供应器测试端连接的第一电极和第二电极，所述第一电极为板形电极，第二电极为针形电极，所述针形电极呈弧形。本发明采用2个分别独立的电极，放置位置和角度可以灵活调整；本发明的第二电极为针形电极，直径较细，在放入鸡胚视顶盖底部时，不会对组织或卵黄膜造成损伤，避免由此引起的胚胎死亡，且能够起到良好的导电作用，同时该针形电极呈弧形，弧形设计能够在不损伤鸡胚的情况下起到固定鸡胚视顶盖的作用。
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公开(公告)号：CN102321570A
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN201110241537.3
申请日：2011-08-22
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种鸡胚培养及活体电转基因方法，包括以下步骤：带壳培养，培养2天—3天时分别做带壳原位电转基因；去壳培养，将受精鸡蛋培养到第3天时，去壳置培养器皿放入恒温恒湿培养箱中培养；原位电转基因步骤，带壳培养2-3天将0.5μg/μl的质粒0.5-1μl用显微注射毛细玻璃针在体视显微镜下注射到脊髓或去壳培养5-6天注射到视顶部位，将电极放在已注射质粒的脊髓或视顶部位两侧，阳性电极在拟转基因一侧，进行电转；然后进行组织取材、包埋和切片。通过对传统培养方法的优化，建立鸡胚胎带壳和去壳培养技术，提高鸡胚培养成活率，为鸡胚活体原位电转基因提供了基础。
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公开(公告)号：CN119913205A
公开(公告)日：2025-05-02
申请号：CN202510173089.X
申请日：2025-02-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9构建Ago2基因敲除BV2细胞系的方法及应用，使用在线工具CRISPOR在小鼠Ago2基因exon4和exon11的上下游各设计及合成1个sgRNA，然后将其电转入BV2细胞系，经单克隆细胞筛选、PCR鉴定和Sanger测序鉴定获得Ago2基因敲除BV2细胞系，最后使用Western blot检测Ago2蛋白表达验证BV2细胞系中Ago2基因的敲除效果。本发明成功构建的Ago2基因敲除BV2细胞系为研究Ago2基因功能、药物研发及Lessel‑Kreienkamp综合征疾病机制等研究提供有利工具。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106754637A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611024566.3
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
CPC classification number: C12N5/0682 , C12N1/06
Abstract: 本发明涉及一种经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法，其包括以下步骤：1)取经血样本，加入样本保存液混匀，然后进行离心，收集沉淀物；2)将步骤1)得到的沉淀物加入红细胞裂解液中，混匀后静置进行裂解，然后进行离心，收集沉淀物；3)将步骤2)得到的沉淀物用细胞培养基重悬，然后进行细胞培养，收集培养获得的细胞，即为所述的经血源性子宫内膜干细胞。本发明所述的分离提取方法能够快速、有效分离提取经血源性子宫内膜干细胞，而且操作简单，细胞收率高，细胞活性的损伤少。
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公开(公告)号：CN102321570B
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201110241537.3
申请日：2011-08-22
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种鸡胚培养及活体电转基因方法，包括以下步骤：带壳培养，培养2天-3天时分别做带壳原位电转基因；去壳培养，将受精鸡蛋培养到第3天时，去壳置培养器皿放入恒温恒湿培养箱中培养；原位电转基因步骤，带壳培养2-3天将0.5μg/μl的质粒0.5-1μl用显微注射毛细玻璃针在体视显微镜下注射到脊髓或去壳培养5-6天注射到视顶部位，将电极放在已注射质粒的脊髓或视顶部位两侧，阳性电极在拟转基因一侧，进行电转；然后进行组织取材、包埋和切片。通过对传统培养方法的优化，建立鸡胚胎带壳和去壳培养技术，提高鸡胚培养成活率，为鸡胚活体原位电转基因提供了基础。
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公开(公告)号：CN108514462A
公开(公告)日：2018-09-11
申请号：CN201810594872.3
申请日：2018-06-11
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种小鼠灌注固定装置及其灌注固定方法。本发明所述的小鼠灌注固定装置，包括一固定装置和一输液装置；所述的固定装置为有机玻璃制成的透明长方状盒体，并设有操作台、器械盒和收集盒；所述的输液装置设有输液瓶、输液泵、输液管和输液针。本发明所述的小鼠灌注固定装置，集操作台、器械盒和废液收集盒为一体，具有功能多样、安全、高效、便捷等优点。
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公开(公告)号：CN102181430A
公开(公告)日：2011-09-14
申请号：CN201110047644.2
申请日：2011-02-28
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种制备两端带有限制性内切酶粘性末端的目的DNA片段的方法。本发明中，根据骨架载体上预期插入的多克隆位点设计两对引物，以含有目的基因的DNA为模板，分别用两对引物进行PCR扩增，得到两种PCR扩增产物，将两种PCR扩增产物混合后依次进行变性和退火，得到目的DNA片段(两端带有相应限制性内切酶的粘性末端，中间为目的基因)，目的DNA片段可以定向克隆至骨架载体的预期多克隆位点。与传统PCR产物克隆方法相比，本发明所提供的克隆方法简单易行，成本低，效率高，通用性好，可以广泛应用于PCR产物的快速定向克隆。
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公开(公告)号：CN119506350A
公开(公告)日：2025-02-25
申请号：CN202411657377.4
申请日：2024-11-19
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了Trem2基因过表达和敲除的BV2细胞系构建方法及应用，首先基于转座子系统构建Trem2基因过表达的BV2细胞系，具体方法包括：（1）载体构建；（2）细胞转染；（3）稳转细胞株扩增；（4）稳转细胞株验证，最终成功构建Trem2基因过表达的BV2细胞系。其次基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Trem2基因敲除的BV2细胞系，具体方法包括：（1）靶点设计及载体构建；（2）细胞转染；（3）单克隆筛选；（4）敲除细胞系验证，最终成功构建Trem2基因敲除的BV2细胞系。本发明建立的Trem2基因过表达和敲除的BV2细胞系为靶向Trem2治疗中枢神经系统疾病提供有利工具。
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