甘蔗黑穗病菌巢式PCR快速检测方法

    公开(公告)号:CN102329858A

    公开(公告)日:2012-01-25

    申请号:CN201110218585.0

    申请日:2011-08-02

    Abstract: 本发明涉及甘蔗病原菌检测领域,提出甘蔗黑穗病菌巢式PCR快速检测方法,包括基因组DNA提取、第一轮PCR扩增、第二轮PCR扩增、PCR扩增产物检测步骤,其中第一轮PCR扩增中采用真菌核糖体基因转录间隔区ITS的通用引物ITS4和ITS5,第二轮PCR扩增中采用甘蔗黑粉菌核糖体基因转录间隔区ITS的特异引物Smut-L1和Smut-R2,本发明的实质性特点有:1、检测灵敏度极高,即使在甘蔗无黑穗病症状或者感染黑粉菌量极少时也能准确检测出黑穗病菌。2、特异性强,受其他菌类干扰小,准确率高。3、具有耗时短、检测速度快的特点,适用于甘蔗引种检疫、脱毒种苗质量检测及甘蔗黑穗病抗性鉴定早期无症状叶片检测等。

    甘蔗黑穗病菌巢式PCR快速检测方法

    公开(公告)号:CN102329858B

    公开(公告)日:2013-02-13

    申请号:CN201110218585.0

    申请日:2011-08-02

    Abstract: 本发明涉及甘蔗病原菌检测领域,提出甘蔗黑穗病菌巢式PCR快速检测方法,包括基因组DNA提取、第一轮PCR扩增、第二轮PCR扩增、PCR扩增产物检测步骤,其中第一轮PCR扩增中采用真菌核糖体基因转录间隔区ITS的通用引物ITS4和ITS5,第二轮PCR扩增中采用甘蔗黑粉菌核糖体基因转录间隔区ITS的特异引物Smut-L1和Smut-R2,本发明的实质性特点有:1、检测灵敏度极高,即使在甘蔗无黑穗病症状或者感染黑粉菌量极少时也能准确检测出黑穗病菌。2、特异性强,受其他菌类干扰小,准确率高。3、具有耗时短、检测速度快的特点,适用于甘蔗引种检疫、脱毒种苗质量检测及甘蔗黑穗病抗性鉴定早期无症状叶片检测等。

    转Bt基因甘蔗对螟虫抗性的快速鉴定方法

    公开(公告)号:CN101113977A

    公开(公告)日:2008-01-30

    申请号:CN200710027302.8

    申请日:2007-03-27

    Abstract: 本发明涉及一种转Bt基因甘蔗对螟虫抗性的人工接虫快速鉴定方法,包括温室桶栽甘蔗、虫源选择、人工接虫和抗性评价步骤,其中对同一批待评价的转Bt基因甘蔗品系的试验虫源为同一头甘蔗条螟雌蛾所产卵的初孵幼虫,或将2~3头雌蛾产生的初孵幼虫分别平均分配到每株待测蔗株,对桶栽试验甘蔗进行人工接虫5天后调查结果,根据幼虫的成活率、甘蔗的受害程度综合评价参试甘蔗品系的抗虫性。本发明的最显著的特点是:1.最大限度地保证试验虫源的一致性和接虫时间的统一性,确保鉴定结果的准确性;2.抗虫性鉴定周期短,7~10天即可得到试验结果;3.不存在田间条件下天敌和特殊的天气(如暴风雨)的影响,试验结果可靠;4.本方法可操作性强。

    一种用于甘蔗叶部真菌病害菌株致病性鉴定的感染方法

    公开(公告)号:CN104313111B

    公开(公告)日:2016-10-12

    申请号:CN201410551558.9

    申请日:2014-10-17

    Abstract: 本发明涉及甘蔗病害检验技术领域,提出一种用于甘蔗叶部真菌病害菌株致病性评价的感染方法,包括步骤有:菌株的准备、叶片的采集及预处理、感染叶片的准备、感染、培养、菌株的致病性评价,其特征在于:感染叶片的准备步骤是:把叶片剪成4~8 cm的长段,用纸巾包住叶片的两端,放入灭过菌的培养皿内,并往叶片两端的纸巾滴加灭过菌的清水;感染步骤是:用扎孔器对培养皿中的叶片沿叶中脉两侧扎孔,用灭过菌的镊子夹菌丝块放到叶片扎有孔的位置上作为试验培养皿;本发明具有以下突出的实质性特点和显著进步:(1)感染需要的甘蔗叶片和菌丝块少;(2)感染后蔗叶可以控温及双重控湿,保证了病原菌发病对高温高湿的要求;(3)感染后有致病性的菌株发病显著、灵敏度高。

    转Bt基因甘蔗对螟虫抗性的快速鉴定方法

    公开(公告)号:CN101113977B

    公开(公告)日:2010-08-18

    申请号:CN200710027302.8

    申请日:2007-03-27

    Abstract: 本发明涉及一种转Bt基因甘蔗对螟虫抗性的人工接虫快速鉴定方法,包括温室桶栽甘蔗、虫源选择、人工接虫和抗性评价步骤,其中对同一批待评价的转Bt基因甘蔗品系的试验虫源为同一头甘蔗条螟雌蛾所产卵的初孵幼虫,或将2~3头雌蛾产生的初孵幼虫分别平均分配到每株待测蔗株,对桶栽试验甘蔗进行人工接虫5天后调查结果,根据幼虫的成活率、甘蔗的受害程度综合评价参试甘蔗品系的抗虫性。本发明的最显著的特点是:1. 最大限度地保证试验虫源的一致性和接虫时间的统一性,确保鉴定结果的准确性;2. 抗虫性鉴定周期短,7~10天即可得到试验结果;3. 不存在田间条件下天敌和特殊的天气(如暴风雨)的影响,试验结果可靠;4. 本方法可操作性强。

    去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法

    公开(公告)号:CN101361459A

    公开(公告)日:2009-02-11

    申请号:CN200810198634.7

    申请日:2008-09-19

    Abstract: 本发明涉及甘蔗种苗的繁殖生产,提供一种去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗种苗的方法,包括如下步骤:热水处理少量原种并生产、以其再生植株经斑点酶标免疫试验(DB-EIA)检测为阴性的茎尖为外植体,经诱导培养、继代增殖培养、促根培养、假植及二级或三级苗圃扩繁生产健康种苗,并在苗圃扩繁中注意砍种工具(蔗刀)的消毒,在种苗出圃用于大田生产用种前,抽样取蔗茎汁用DB-EIA检测RSD病菌,确保提供合格种苗。本发明的优点是:能彻底去除甘蔗种苗宿根矮病病原菌,年繁殖系数高达1万倍以上,且种苗无变异,具有快速、高效、安全的优点,适合工厂化、规模化、标准化生产甘蔗健康种苗。

    果蔗腋芽脱毒组培快繁方法

    公开(公告)号:CN101803574B

    公开(公告)日:2012-02-01

    申请号:CN201010160577.0

    申请日:2010-04-23

    Abstract: 本发明涉及甘蔗脱毒组培技术领域。提出一种果蔗脱毒组培快繁的方法,其特征在于包括如下步骤:1)植体的选取与灭菌;2)腋芽诱导培养;3)分化培养;4)增殖培养;5)生根培养;6)移栽;7)病毒(菌)检测。其特征在于步骤3)中的分化培养基配方为:MS+TDZ(0.001~0.01)mg/L+IBA(0.02~0.05)mg/L+蔗糖(30~40)g/L+精氨酸(100~150)mg/L+肌醇(100~150)mg/L。本发明以果蔗腋芽为外植体,接种操作容易,成活率高达90%以上。所采用的分化培养基配方,在分化培养过程中能快速使诱导芽分化出丛芽,采用本发明繁殖果蔗脱毒苗速度快,月繁殖系数达5~10倍,适合于大规模工厂化生产。

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