公开(公告)号：CN101736022B

公开(公告)日：2012-09-05

申请号：CN200810202926.3

申请日：2008-11-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 谭相石 ,  钟方芳 ,  王红艳 ,  黄仲贤

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N9/16

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及一种制备人可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的方法。本发明方法通过如下步骤：(1)将人可溶性鸟苷酸环化酶核苷酸编码序列装入表达载体，并转化表达用大肠杆菌菌株；(2)将(1)所得菌株接种于改进后的TB培养液，IPTG诱导表达过夜；(3)将(2)所得菌体破菌，离心，过Ni-NTA柱，tev酶酶切，过Ni-NTA柱，heme重组。制得纯度达90％以上的人可溶性鸟苷酸环化酶蛋白，产量达20mg/L以上，本方法能克服目前人可溶性鸟苷酸环化酶产量较低，成本较高，不能满足对sGC的应用需求的缺陷，是目前产量最高的低成本表达方法。

公开(公告)号：CN101736022A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200810202926.3

申请日：2008-11-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 谭相石 ,  钟方芳 ,  王红艳 ,  黄仲贤

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N9/16

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及一种人可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的高效制备方法。本发明方法通过如下步骤：(1)将人可溶性鸟苷酸环化酶核苷酸编码序列装入表达载体，并转化表达用大肠杆菌菌株；(2)将(1)所得菌株接种于改进后的TB培养液，IPTG诱导表达过夜；(3)将(2)所得菌体破菌，离心，过Ni-NTA柱，tev酶酶切，过Ni-NTA柱，heme重组。制得纯度达90％以上的人可溶性鸟苷酸环化酶蛋白，产量达20mg/L以上，本方法能克服目前人可溶性鸟苷酸环化酶产量较低，成本较高，不能满足对sGC的应用需求的缺陷，是目前产量最高的低成本表达方法。

公开(公告)号：CN1141395C

公开(公告)日：2004-03-10

申请号：CN01131966.6

申请日：2001-10-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 黄仲贤 ,  余文浩 ,  高原 ,  谢毅

IPC: C12P21/02

Abstract: 本发明是一种用蛋白质工程技术高效制备金属硫蛋白的方法。现有技术一直难以得到比较高的产率，虽然融合蛋白表达技术为金属硫蛋白的表达提供了新方法，但是仍存在产率低这个不足之处。本发明用基因工程方法构建金属硫蛋白或其突变体基因的表达质粒，转入大肠杆菌工程菌中培养发酵，诱导后加入金属离子，继续培养，收集菌体。菌体超声破菌、离心后用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱静态吸附，柱上凝血酶酶切，再经柱层析脱盐，盐梯度洗脱，收集目标蛋白。本发明方法可得纯度达95%以上的目标蛋白。用本发明方法制备的猴金属硫蛋白I的六个突变体蛋白，产量与纯度均与野生型重组蛋白类似。

公开(公告)号：CN101736005A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200810202928.2

申请日：2008-11-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 应天雷 ,  谢琎 ,  钟方芳 ,  王中华 ,  冯彦娇 ,  黄仲贤 ,  谭相石

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K14/80

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种高效制备人细胞色素c的方法。现有技术一直难以得到高纯度的全长人细胞色素c，并且存在产率低的不足。本发明利用RT-PCR等基因工程技术得到了人细胞色素c的cDNA，并构建了质粒，转入大肠杆菌工程菌培养发酵，建立了人细胞色素c的高效表达、纯化方法。本发明方法可得纯度达98％以上的全长人细胞色素c蛋白。该方法人细胞色素c的产量可达20mg/L菌液以上，是目前已知最高的，比通常文献所报道的提高了数倍。本发明在生物医药领域有重大应用价值。

公开(公告)号：CN1348010A

公开(公告)日：2002-05-08

申请号：CN01131966.6

申请日：2001-10-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 黄仲贤 ,  余文浩 ,  高原 ,  谢毅

IPC: C12P21/02

Abstract: 本发明是一种用蛋白质工程技术高效制备金属硫蛋白的方法。现有技术一直难以得到比较高的产率,虽然融合蛋白表达技术为金属硫蛋白的表达提供了新方法,但是仍存在产率低这个不足之处。本发明用基因工程方法构建金属硫蛋白或其突变体基因的表达质粒,转入大肠杆菌工程菌中培养发酵,诱导后加入金属离子,继续培养,收集菌体。菌体超声破菌、离心后用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱静态吸附,柱上凝血酶酶切,再经柱层析脱盐,盐梯度洗脱,收集目标蛋白。本发明方法可得纯度达95%以上的目标蛋白。用本发明方法制备的猴金属硫蛋白I的六个突变体蛋白,产量与纯度均与野生型重组蛋白类似。

公开(公告)号：CN101736004A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200810202927.8

申请日：2008-11-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 谭相石 ,  包勤贵 ,  丁志春 ,  黄仲贤

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K14/47

Abstract: 本发明属于基因工程和蛋白工程领域，具体涉及一种获得高纯度淀粉样多肽Aβ(1-40)的方法。目前，淀粉样多肽多为利用化学合成的手段获得，本发明首次采用生物工程方法表达可溶性的淀粉样多肽。本发明以smt3-polyQ基因为基础，构建表达质粒，转入大肠杆菌工程菌培养，收集菌体。菌体超声破菌、离心后用Ni柱纯化，经过superdex？G-75分离纯化和除盐处理得到纯度达95％以上的融合蛋白。然后利用SUMO蛋白酶酶切，后经过镍柱分离纯化，再经过superdex？G-75分离纯化和除盐处理可以得到野生型淀粉样多肽Aβ(1-40)。