公开(公告)号：CN101736022A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200810202926.3

申请日：2008-11-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 谭相石 ,  钟方芳 ,  王红艳 ,  黄仲贤

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N9/16

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及一种人可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的高效制备方法。本发明方法通过如下步骤：(1)将人可溶性鸟苷酸环化酶核苷酸编码序列装入表达载体，并转化表达用大肠杆菌菌株；(2)将(1)所得菌株接种于改进后的TB培养液，IPTG诱导表达过夜；(3)将(2)所得菌体破菌，离心，过Ni-NTA柱，tev酶酶切，过Ni-NTA柱，heme重组。制得纯度达90％以上的人可溶性鸟苷酸环化酶蛋白，产量达20mg/L以上，本方法能克服目前人可溶性鸟苷酸环化酶产量较低，成本较高，不能满足对sGC的应用需求的缺陷，是目前产量最高的低成本表达方法。

公开(公告)号：CN101736022B

公开(公告)日：2012-09-05

申请号：CN200810202926.3

申请日：2008-11-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 谭相石 ,  钟方芳 ,  王红艳 ,  黄仲贤

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N9/16

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及一种制备人可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的方法。本发明方法通过如下步骤：(1)将人可溶性鸟苷酸环化酶核苷酸编码序列装入表达载体，并转化表达用大肠杆菌菌株；(2)将(1)所得菌株接种于改进后的TB培养液，IPTG诱导表达过夜；(3)将(2)所得菌体破菌，离心，过Ni-NTA柱，tev酶酶切，过Ni-NTA柱，heme重组。制得纯度达90％以上的人可溶性鸟苷酸环化酶蛋白，产量达20mg/L以上，本方法能克服目前人可溶性鸟苷酸环化酶产量较低，成本较高，不能满足对sGC的应用需求的缺陷，是目前产量最高的低成本表达方法。

公开(公告)号：CN101736005A

公开(公告)日：2010-06-16

申请号：CN200810202928.2

申请日：2008-11-18

Applicant: 复旦大学

Inventor： 应天雷 ,  谢琎 ,  钟方芳 ,  王中华 ,  冯彦娇 ,  黄仲贤 ,  谭相石

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K14/80

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种高效制备人细胞色素c的方法。现有技术一直难以得到高纯度的全长人细胞色素c，并且存在产率低的不足。本发明利用RT-PCR等基因工程技术得到了人细胞色素c的cDNA，并构建了质粒，转入大肠杆菌工程菌培养发酵，建立了人细胞色素c的高效表达、纯化方法。本发明方法可得纯度达98％以上的全长人细胞色素c蛋白。该方法人细胞色素c的产量可达20mg/L菌液以上，是目前已知最高的，比通常文献所报道的提高了数倍。本发明在生物医药领域有重大应用价值。