一种检测细胞内蛋白质降解的方法

    公开(公告)号:CN104155452A

    公开(公告)日:2014-11-19

    申请号:CN201310179334.5

    申请日:2013-05-15

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 鲁伯埙 崔笑添

    CPC classification number: G01N33/54373 G01N33/582 G01N33/6872

    Abstract: 本发明属于生物化学领域,涉及一种检测细胞内蛋白质降解的方法,包括步骤:(1)利用甲硫氨酸类似物将细胞内新合成的蛋白质的甲硫氨酸标记上叠氮小分子基团,(2)在不同的时间点裂解细胞,通过CuAAC反应将特定的可被识别的分子偶联在蛋白质的叠氮小分子基团上,(3)在反应体系中直接利用均相时间分辨荧光共振原理(HTRF)对偶联了步骤(2)中可被识别的分子的目标蛋白进行定量,从而确定目标蛋白的降解速率。本方法无需同位素或细胞毒素的蛋白质降解测量新方法,并达到了与高通量筛选兼容,可用于医药产业界筛选疾病蛋白降解相关药物,以及学术界对特定蛋白降解相关信号通路的筛选等。

    一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法

    公开(公告)号:CN104280366B

    公开(公告)日:2017-10-10

    申请号:CN201310276185.4

    申请日:2013-07-03

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 鲁伯埙 胡朝阳

    Abstract: 本发明属生物化学领域,涉及一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法。本方法基于能量转移均相时间分辨荧光共振的高通量检测技术,用于快速寻找化合物靶蛋白。本方法无需质谱分析及蛋白纯化检测化合物与蛋白质结合的测量,达到了与高通量筛选兼容。与传统的利用亲和柱的药物蛋白靶检测技术比较,本方法中加入药物无需裂解细胞,不需经过洗涤过程,从而降低传统生化方法产生的假阳性。本方法具有灵敏度高、重复性好、操作相对简便的特点,可用于化合物的体外蛋白靶点的高通量筛选,以及医药产业界筛选疾病蛋白结合的化合物,及学术界对与待定蛋白功能结构域的化合物筛选等。

    一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法

    公开(公告)号:CN104280366A

    公开(公告)日:2015-01-14

    申请号:CN201310276185.4

    申请日:2013-07-03

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 鲁伯埙 胡朝阳

    Abstract: 本发明属生物化学领域,涉及一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法。本方法基于能量转移均相时间分辨荧光共振的高通量检测技术,用于快速寻找化合物靶蛋白。本方法无需质谱分析及蛋白纯化检测化合物与蛋白质结合的测量,达到了与高通量筛选兼容。与传统的利用亲和柱的药物蛋白靶检测技术比较,本方法中加入药物无需裂解细胞,不需经过洗涤过程,从而降低传统生化方法产生的假阳性。本方法具有灵敏度高、重复性好、操作相对简便的特点,可用于化合物的体外蛋白靶点的高通量筛选,以及医药产业界筛选疾病蛋白结合的化合物,及学术界对与待定蛋白功能结构域的化合物筛选等。

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