公开(公告)号：CN104155452A

公开(公告)日：2014-11-19

申请号：CN201310179334.5

申请日：2013-05-15

Applicant: 复旦大学

Inventor： 鲁伯埙 ,  崔笑添

IPC: G01N33/68 ,  G01N21/64

CPC classification number: G01N33/54373 ,  G01N33/582 ,  G01N33/6872

Abstract: 本发明属于生物化学领域，涉及一种检测细胞内蛋白质降解的方法，包括步骤：（1）利用甲硫氨酸类似物将细胞内新合成的蛋白质的甲硫氨酸标记上叠氮小分子基团，（2）在不同的时间点裂解细胞，通过CuAAC反应将特定的可被识别的分子偶联在蛋白质的叠氮小分子基团上，（3）在反应体系中直接利用均相时间分辨荧光共振原理（HTRF）对偶联了步骤（2）中可被识别的分子的目标蛋白进行定量，从而确定目标蛋白的降解速率。本方法无需同位素或细胞毒素的蛋白质降解测量新方法，并达到了与高通量筛选兼容，可用于医药产业界筛选疾病蛋白降解相关药物，以及学术界对特定蛋白降解相关信号通路的筛选等。

公开(公告)号：CN106996977A

公开(公告)日：2017-08-01

申请号：CN201610045745.9

申请日：2016-01-22

Applicant: 复旦大学

Inventor： 鲁伯埙 ,  吴鹏 ,  崔笑添

IPC: G01N33/68

CPC classification number: G01N33/68

Abstract: 本发明属生物化学领域，涉及新的测量细胞内蛋白质降解的方法，包括：用甲硫氨酸类似物将细胞内新合成的蛋白质的甲硫氨酸标记上叠氮小分子基团；在不同的时间点裂解细胞，通过SPAAC反应将特定的可被识别的分子偶联在蛋白质的叠氮小分子基团上；利用免疫沉淀法将所述可被识别的分子偶联的蛋白质沉淀：用均相时间分辨荧光共振原理对免疫沉淀前后样品溶液中目标蛋白定量，用差减法得出被标记的目标蛋白占总目标蛋白的比例，从而确定目标蛋白的降解速率。该方法可进行非同位素依赖的，不依赖蛋白标签的，针对内源性蛋白并与高通量筛选兼容的蛋白质降解测量。可用于筛选疾病蛋白降解相关药物等。