公开(公告)号：CN1320113C

公开(公告)日：2007-06-06

申请号：CN03129043.4

申请日：2003-06-05

Applicant: 复旦大学 ,  上海复旦新杨生物科技有限责任公司 ,  上海恒达科技发展股份有限公司

Inventor： 钱志康 ,  宣宝琴 ,  李琳 ,  徐剑锋 ,  谭畅 ,  闵太善 ,  王维荣 ,  谢承光 ,  沈水源 ,  程小伟 ,  史顺成 ,  黄伟达

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明涉及一种利用大肠杆菌发酵大规模制备RNA干扰用小干扰RNA分子的新方法。本发明构建了长双链RNA表达载体，并转化大肠杆菌宿主菌，通过大规模发酵，用碱-SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物。该混合物用CF-11柱进行纯化得到长双链RNA。最后利用大肠杆菌Ⅲ型RNA酶将长双链RNA切成12-30bp的小干扰RNA。得到的siRNA用分光光度法检测其纯度与浓度，OD260/OD280＝1.978，表明样品的纯度相当高。每100g大肠杆菌菌体得到siRNA样品约为210mg。

公开(公告)号：CN1164766C

公开(公告)日：2004-09-01

申请号：CN02137474.0

申请日：2002-10-16

Applicant: 复旦大学

Inventor： 黄伟达 ,  王奕然 ,  钱志康 ,  邬敏辰 ,  王维荣

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明是一种利用PCR确定已知DNA序列的两侧未知序列的方法。它是通过对已知序列的限制性内切酶位点进行酶切，设计合适的PCR引物，进行PCR扩增，最后对所得片断进行克隆和序列测定。本发明技术设计简单易行，操作限制少，应用范围广，结果分析简便可靠，而且成本低廉。

公开(公告)号：CN1276086C

公开(公告)日：2006-09-20

申请号：CN03142232.2

申请日：2003-08-13

Applicant: 复旦大学 ,  上海恒达科技发展股份有限公司

Inventor： 钱志康 ,  宣宝琴 ,  徐剑锋 ,  李琳 ,  闵太善 ,  程小伟 ,  史顺成 ,  黄伟达

IPC: C12N15/70 ,  C12P19/34 ,  A61K31/7088 ,  A61P1/16 ,  A61P31/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体为一种利用大肠杆菌发酵制备RNA干扰用双链RNA分子或小干扰RNA分子的方法，并将这些RNA分子用于制备治疗乙型肝炎的药物。将本发明得到的ldsRNA或siRNA以适当的比例与乙型肝炎病毒表达载体混合，并用尾静脉液压法注射到小鼠体内。结果显示非同源性序列ldsRNA和siRNA基本不抑制乙型肝炎病毒在小鼠体内的复制，而与乙肝病毒基因同源性的ldsRNA和siRNA可以有效抑制乙型肝炎病毒在小鼠体内的感染复制，抑制率高达90%以上。

公开(公告)号：CN1458279A

公开(公告)日：2003-11-26

申请号：CN03129043.4

申请日：2003-06-05

Applicant: 复旦大学 ,  上海复旦新杨生物科技有限责任公司 ,  上海恒达科技发展股份有限公司

Inventor： 钱志康 ,  宣宝琴 ,  李琳 ,  徐剑锋 ,  谭畅 ,  闵太善 ,  王维荣 ,  谢承光 ,  沈水源 ,  程小伟 ,  史顺成 ,  黄伟达

IPC: C12P19/34 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明涉及一种利用大肠杆菌发酵大规模制备RNA干扰用小干扰RNA分子的新方法。本发明构建了长双链RNA表达载体，并转化大肠杆菌宿主菌，通过大规模发酵，用碱－SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物。该混合物用CF－11柱进行纯化得到长双链RNA。最后利用大肠杆菌III型RNA酶将长双链RNA切成12－30bp的小干扰RNA。得到的siRNA用分光光度法检测其纯度与浓度，OD260/OD280＝1.978，表明样品的纯度相当高。每100g大肠杆菌菌体得到siRNA样品约为210mg。

公开(公告)号：CN1226628C

公开(公告)日：2005-11-09

申请号：CN02111698.9

申请日：2002-05-16

Applicant: 复旦大学 ,  上海恒达科技发展股份有限公司

Inventor： 黄伟达 ,  钱志康 ,  宣宝琴 ,  徐剑锋 ,  王奕然 ,  万凯 ,  丁天 ,  章宏海 ,  史顺成 ,  程小伟 ,  宋海林

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/543 ,  G01N33/50

Abstract: 本发明属分子生物学技术领域，具体涉及一种蛋白质芯片及其制备方法。该蛋白质芯片是在固体基质表面通过共价结合交联金属离子螯合物，在碱性条件下金属离子螯合物与金属离子螯合，蛋白质分子通过其末端的组氨酸标记(His-tag)与上述金属离子螯合，定向结合于固体基质表面而构成。这种非共价的结合方式是可逆反应，因此固体基质可以重复利用。固定于这种蛋白质芯片上的蛋白质可以进行各种生化反应，可应用于生命科学研究、疾病诊断和药物筛选等领域，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN1488761A

公开(公告)日：2004-04-14

申请号：CN03142232.2

申请日：2003-08-13

Applicant: 复旦大学 ,  上海恒达科技发展股份有限公司

Inventor： 钱志康 ,  宣宝琴 ,  徐剑锋 ,  李琳 ,  闵太善 ,  程小伟 ,  史顺成 ,  黄伟达

IPC: C12P19/34 ,  C12N15/70 ,  A61K31/7088 ,  A61P1/16 ,  A61P31/12

Abstract: 本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体为一种利用大肠杆菌发酵制备RNA干扰用双链RNA分子或小干扰RNA分子的方法，并将这些RNA分子用于制备治疗乙型肝炎的药物。将本发明得到的ldsRNA或siRNA以适当的比例与乙型肝炎病毒表达载体混合，并用尾静脉液压法注射到小鼠体内。结果显示非同源性序列ldsRNA和siRNA基本不抑制乙型肝炎病毒在小鼠体内的复制，而与乙肝病毒基因同源性的ldsRNA和siRNA可以有效抑制乙型肝炎病毒在小鼠体内的感染复制，抑制率高达90％以上。

公开(公告)号：CN1418968A

公开(公告)日：2003-05-21

申请号：CN02137474.0

申请日：2002-10-16

Applicant: 复旦大学

Inventor： 黄伟达 ,  王奕然 ,  钱志康 ,  邬敏辰 ,  王维荣

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明是一种利用PCR确定已知DNA序列的两侧未知序列的方法。它是通过对已知序列的限制性内切酶位点进行酶切，设计合适的PCR引物，进行PCR扩增，最后对所得片断进行克隆和序列测定。本发明技术设计简单易行，操作限制少，应用范围广，结果分析简便可靠，而且成本低廉。

公开(公告)号：CN1381723A

公开(公告)日：2002-11-27

申请号：CN02111698.9

申请日：2002-05-16

Applicant: 复旦大学 ,  上海恒达科技发展股份有限公司

Inventor： 黄伟达 ,  钱志康 ,  宣宝琴 ,  徐剑锋 ,  王奕然 ,  万凯 ,  丁天 ,  章宏海 ,  史顺成 ,  程小伟 ,  宋海林

IPC: G01N33/50 ,  G01N33/68 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明属分子生物学技术领域,具体涉及一种蛋白质芯片及其制备方法。该蛋白质芯片是在固体基质表面通过共价结合交联金属离子螯合物,在碱性条件下金属离子螯合物与金属离子螯合,蛋白质分子通过其末端的组氨酸标记(His－tag)与上述金属离子螯合,定向结合于固体基质表面而构成。这种非共价的结合方式是可逆反应,因此固体基质可以重复利用。固定于这种蛋白质芯片上的蛋白质可以进行各种生化反应,可应用于生命科学研究、疾病诊断和药物筛选等领域,具有广泛的应用前景。