基因工程改造的耐热人溶菌酶

    公开(公告)号:CN107475222B

    公开(公告)日:2020-04-03

    申请号:CN201710935533.2

    申请日:2017-10-10

    Abstract: 本发明公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶;包括R41H和A92L两个氨基酸位点的突变:其中R41H可以提高人溶菌酶的耐热性,A92L提高了对变性剂的耐受度,而且R41H和A92L组合以后不仅可以更大幅度的提高人溶菌酶的耐热性,而且能够提高人溶菌酶对变性剂的耐受度;将本发明还公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶在高温造粒型饲料制备中的应用,所述的基因工程改造的耐热人溶菌酶的耐热性相对来说要高于一般的酶,在温度80‑85℃的高温造粒过程中,在至少前8‑30min内的活性能够维持在50%以上;本发明还公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶在食品保鲜中的应用,以耐热人溶菌酶为主要活性成分的保鲜剂,用于水产或肉制品的保鲜,可以延长低温肉制品的保质期一倍以上。

    高效利用木糖和葡萄糖的酿酒酵母重组菌的构建及应用

    公开(公告)号:CN110229761A

    公开(公告)日:2019-09-13

    申请号:CN201910530202.X

    申请日:2019-06-19

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开了高效利用木糖和葡萄糖的酿酒酵母重组菌的构建及应用,在酿酒酵母木糖代谢菌株中分别过表达内源噻唑合酶THI4或木酮糖还原酶XYL2。该高效利用木糖和葡萄糖的酿酒酵母重组菌的构建及应用,在过表达来源于热带假丝酵母的木糖还原酶XR(由XYL1编码)和木糖醇脱氢酶XDH(由XYL2编码)的过表达质粒pYX212-XR-XDH的基础上,进一步过表达酿酒酵母BY4741内源噻唑合酶THI4或木酮糖还原酶XYL2,转化单倍体酿酒酵母BY4741及二倍体酿酒酵母Kyokai No.6。该方法应用常用组成型高拷贝质粒pYX212,能够实现在混糖发酵过程中提高木糖、葡萄糖共利用过程中碳源的消耗速率和乙醇产量。

    一种左旋多巴的生物合成方法

    公开(公告)号:CN110791536B

    公开(公告)日:2023-01-17

    申请号:CN201911207728.0

    申请日:2019-11-30

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开了一种左旋多巴的生物合成方法,属于生物工程技术领域。本发明构建了包含酪氨酸酚裂解酶基因dhtpl的重组表达载体pJJ‑dhtpl,并实现了酪氨酸酚裂解酶在大肠杆菌BL21中的高效表达。利用表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞,在16℃,pH 7.5‑8.0,真空下可以将廉价的邻苯二酚和丙酮酸铵一步催化合成左旋多巴。左旋多巴难溶于水,在该反应体系中以晶体形式析出,反应进行彻底,主要反应物邻苯二酚的摩尔转化率达96%以上。表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞具有良好的催化稳定性,可以通过多次、分批添加邻苯二酚和丙酮酸铵,不断累积左旋多巴。本发明生产过程简单,原材料易得,产物易分离纯化,对于大规模工业化生产具有良好的应用前景。

    一种左旋多巴的生物合成方法

    公开(公告)号:CN110791536A

    公开(公告)日:2020-02-14

    申请号:CN201911207728.0

    申请日:2019-11-30

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开了一种左旋多巴的生物合成方法,属于生物工程技术领域。本发明构建了包含酪氨酸酚裂解酶基因dhtpl的重组表达载体pJJ-dhtpl,并实现了酪氨酸酚裂解酶在大肠杆菌BL21中的高效表达。利用表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞,在16℃,pH 7.5-8.0,真空下可以将廉价的邻苯二酚和丙酮酸铵一步催化合成左旋多巴。左旋多巴难溶于水,在该反应体系中以晶体形式析出,反应进行彻底,主要反应物邻苯二酚的摩尔转化率达96%以上。表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞具有良好的催化稳定性,可以通过多次、分批添加邻苯二酚和丙酮酸铵,不断累积左旋多巴。本发明生产过程简单,原材料易得,产物易分离纯化,对于大规模工业化生产具有良好的应用前景。

    基因工程改造的耐热人溶菌酶

    公开(公告)号:CN107475222A

    公开(公告)日:2017-12-15

    申请号:CN201710935533.2

    申请日:2017-10-10

    Abstract: 本发明公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶;包括R41H和A92L两个氨基酸位点的突变:其中R41H可以提高人溶菌酶的耐热性,A92L提高了对变性剂的耐受度,而且R41H和A92L组合以后不仅可以更大幅度的提高人溶菌酶的耐热性,而且能够提高人溶菌酶对变性剂的耐受度;将本发明还公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶在高温造粒型饲料制备中的应用,所述的基因工程改造的耐热人溶菌酶的耐热性相对来说要高于一般的酶,在温度80-85℃的高温造粒过程中,在至少前8-30min内的活性能够维持在50%以上;本发明还公开了一种基因工程改造的耐热人溶菌酶在食品保鲜中的应用,以耐热人溶菌酶为主要活性成分的保鲜剂,用于水产或肉制品的保鲜,可以延长低温肉制品的保质期一倍以上。

    非水相催化手性醇不对称拆分的立体选择性脂肪酶的快速定量筛选方法

    公开(公告)号:CN103344585B

    公开(公告)日:2015-03-18

    申请号:CN201310205521.6

    申请日:2013-05-27

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开了一种非水相催化手性醇不对称拆分的立体选择性脂肪酶的快速定量筛选方法,利用脂肪酶在无溶剂体系中分别催化脂肪酸乙烯酯与两种立体构型的手性醇之间的转酯化反应,反应4-24小时后,吸取50μl两种构型手性醇的反应液用100μl品红醛在微量比色皿或多孔微孔板中显色,用比色法于500-540nm处测定吸光度或直接用酶标仪于500-540nm处测定吸光度,以确定乙醛的生成量,并根据两种立体构型的手性醇反应生成乙醛的量计算产物对映体过剩量、底物对映体过剩量和酶立体选择性,筛选出生产立体选择性脂肪酶的目的菌株。本发明简单易行、快速方便。

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