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公开(公告)号：CN110791536B
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN201911207728.0
申请日：2019-11-30
Applicant: 南通大学
Abstract: 本发明公开了一种左旋多巴的生物合成方法，属于生物工程技术领域。本发明构建了包含酪氨酸酚裂解酶基因dhtpl的重组表达载体pJJ‑dhtpl，并实现了酪氨酸酚裂解酶在大肠杆菌BL21中的高效表达。利用表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞，在16℃，pH 7.5‑8.0，真空下可以将廉价的邻苯二酚和丙酮酸铵一步催化合成左旋多巴。左旋多巴难溶于水，在该反应体系中以晶体形式析出，反应进行彻底，主要反应物邻苯二酚的摩尔转化率达96％以上。表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞具有良好的催化稳定性，可以通过多次、分批添加邻苯二酚和丙酮酸铵，不断累积左旋多巴。本发明生产过程简单，原材料易得，产物易分离纯化，对于大规模工业化生产具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN110791536A
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201911207728.0
申请日：2019-11-30
Applicant: 南通大学
Abstract: 本发明公开了一种左旋多巴的生物合成方法，属于生物工程技术领域。本发明构建了包含酪氨酸酚裂解酶基因dhtpl的重组表达载体pJJ-dhtpl，并实现了酪氨酸酚裂解酶在大肠杆菌BL21中的高效表达。利用表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞，在16℃，pH 7.5-8.0，真空下可以将廉价的邻苯二酚和丙酮酸铵一步催化合成左旋多巴。左旋多巴难溶于水，在该反应体系中以晶体形式析出，反应进行彻底，主要反应物邻苯二酚的摩尔转化率达96％以上。表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞具有良好的催化稳定性，可以通过多次、分批添加邻苯二酚和丙酮酸铵，不断累积左旋多巴。本发明生产过程简单，原材料易得，产物易分离纯化，对于大规模工业化生产具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN111676256A
公开(公告)日：2020-09-18
申请号：CN202010613748.4
申请日：2020-06-30
Applicant: 南通大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种L-叔亮氨酸的生物制备方法，通过在大肠杆菌中表达亮氨酸脱氢酶LDH基因和异丙醇脱氢酶IPDH基因，利用酶偶联辅酶再生循环全细胞不对称催化制备L-叔亮氨酸，本发明提供的生物制备方法不需要另外添加辅因子，操作方便，催化剂可反复使用，合成效率高，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN103344585B
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310205521.6
申请日：2013-05-27
Applicant: 南通大学
Abstract: 本发明公开了一种非水相催化手性醇不对称拆分的立体选择性脂肪酶的快速定量筛选方法，利用脂肪酶在无溶剂体系中分别催化脂肪酸乙烯酯与两种立体构型的手性醇之间的转酯化反应，反应4-24小时后，吸取50μl两种构型手性醇的反应液用100μl品红醛在微量比色皿或多孔微孔板中显色，用比色法于500-540nm处测定吸光度或直接用酶标仪于500-540nm处测定吸光度，以确定乙醛的生成量，并根据两种立体构型的手性醇反应生成乙醛的量计算产物对映体过剩量、底物对映体过剩量和酶立体选择性，筛选出生产立体选择性脂肪酶的目的菌株。本发明简单易行、快速方便。
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公开(公告)号：CN103344585A
公开(公告)日：2013-10-09
申请号：CN201310205521.6
申请日：2013-05-27
Applicant: 南通大学
Abstract: 本发明公开了一种非水相催化手性醇不对称拆分的立体选择性脂肪酶的快速定量筛选方法，利用脂肪酶在无溶剂体系中分别催化脂肪酸乙烯酯与两种立体构型的手性醇之间的转酯化反应，反应4-24小时后，吸取50μl两种构型手性醇的反应液用100μl品红醛在微量比色皿或多孔微孔板中显色，用比色法于500-540nm处测定吸光度或直接用酶标仪于500-540nm处测定吸光度，以确定乙醛的生成量，并根据两种立体构型的手性醇反应生成乙醛的量计算产物对映体过剩量、底物对映体过剩量和酶立体选择性，筛选出生产立体选择性脂肪酶的目的菌株。本发明简单易行、快速方便。
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